荧光相关光谱单分子荧光技术的仪器研发和应用
在特定实验条件下检测分子浓度、大小和相互作用是生命科学研究的主要课题。荧光相关光谱(Fluorescence Correlation Spectroscopy;FCS)技术可在溶液样品中或单个活细胞内,以单分子分辨率,无需反应物分离提纯(均相),快速(数秒至数分钟)检测分子或纳米颗粒的浓度、扩散系数/水动力半径、相互作用亲和力(KD值)等特性,可广泛应用在如细胞信号传导机制、生物分子变性聚集、生物大分子液-液相分离、抗体筛选、疾病标志物检测、酶活性检测、外泌体分析、高分子聚合物分析、荧光探针特性分析、纳米颗粒特性分析、纳米药物特性分析等研究领域 。
黄韶辉团队开发了世界首款整合了荧光自相关和交相关技术的桌面式荧光相关光谱仪,以及可与任意倒置荧光显微镜配套并应用于活细胞内分子特性分析的FCS模块。此外仪器还整合了基于溶液样品的单分子荧光技术,比如ALEX smFRET。其解析的生物大分子动态结构-功能机制是对冷冻电镜、X光衍射技术揭示的静态机制的关键补充。该技术在高通量药物筛选和超灵敏疾病标准物检测领域也有着重要的潜在应用。
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