酶联免疫斑点实验，即ELISpot，可以测定PBMC细胞在特定抗原刺激下分泌的细胞因子来评估细胞介导的免疫反应.。本方法中选用CEF peptide pool 作为抗原，刺激PBMC细胞分泌IFN-γ，并利用ELISpot进行检测。PBMC细胞被抗原刺激后产生的IFN-γ会被预包被在板上的抗体捕获，将孔板内的细胞洗去后，加入ALP标记的检测抗体，最后加入底物显色，孔板上会产生砖红色斑点。CTL-ImmunoSpot可以对板上的每个孔进行拍照，并计出每个孔中的斑点数量，斑点数量反映了分泌IFN-γ的PBMC细胞的数量。本方法的LLOQ可以达到大约20个斑点，LOD约3~5个斑点，并且具有较好的精密度，可进一步开发并用于不同抗原的IFN-γ 的检测。