我们建立了利用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）法联合检测血清中硫酸脱氢表雄酮（DHEA-S）、雄烯二酮（A4）、睾酮（T）、17-羟孕酮（17-OHP）、双氢睾酮（DHT）的方法。血清样本经蛋白沉淀后，采用固相萃取，经Agela Venusil MP C18色谱柱（3.0mm×50mm，3μm）分离，以含0.1%甲酸的甲醇和含0.02%甲酸的水为流动相进行梯度洗脱。使用LC-MS/MS正-负离子多反应监测模式进行数据采集。结果表明，5种激素在各自浓度范围内线性关系良好（r2>0.995），回收率均在96%～110%之间，各激素的批内精密度和批间精密度均<10%，DHEA-S、A4、T、17-OHP、DHT的定量下限（LOQ）分别为5.00ng/mL、0.05 ng/mL、0.05 ng/mL、0.025 ng/mL、0.025 ng/mL。该方法快速、准确、灵敏，适用于临床对多囊卵巢综合征（PCOS）患者血清雄激素水平的检测。