寡核苷酸药物是一类小干扰RNA (siRNA)，其序列长度通常仅为20 bp左右。由于siRNA序列很短，因此很难使用PCR直接对siRNA进行扩增。目前，使用较多的方法是设计一种长度为44 bp的茎环引物，通过反转录将siRNA延长，这样将获得足够长度的cDNA。再针对于cDNA设计引物和探针，进行qPCR扩增，最终实现对寡核苷酸的定量分析。我们团队使用这种方法对双链寡核苷酸和发夹小RNA药物进行了RT-qPCR分析，结果表明双链寡核苷酸在10 μg/ml到1 pg/ml，发夹小RNA在7000 ng/ml到0.5 ng/ml的范围内，呈现良好的线性，质控点回收率也满足qPCR接收标准。综上结果，本研究表明使用RT-qPCR可实现对不同类型、具有复杂结构的的寡核苷酸药物进行定量分析，并且灵敏度高，线性范围宽。是一种非常有潜力的寡核苷酸药物生物分析方法。