兔肾上腺皮质细胞

原代培养原理和应用：

一、细胞原代培养是通过特殊分离方法从胚胎、组织器官以及外周血中分离获得单细胞，置于合适的培养基中培养，在无菌、适当温度和一定条件下，使细胞生存、生长和繁殖的过程。原代培养的“代”并非细胞的代数，是指细胞培养的次数，从体内取出组织接种培养到第一次传代的阶段，都属原代培养，一般持续1-4周。常见的原代培养过程如图1所示。

二、原代培养细胞直接来源于活体组织，体外培养也尽量模拟体内环境，使得分离得到的细胞接近生物体内的生活状态，可作为研究生物体细胞的生产、代谢、繁殖、凋亡提供有力手段，亦可用于各种药理作用、药物开发研究和临床实践。

三、原代细胞的质量取决于多个因素：取材、培养条件的优化、无菌操作，特别是组织分离技术等。对于大多数研究者而言，想要获得高质量的原代培养细胞仍然比较困难。尽管原代培养技术已较普遍，但是有时仍会得到一些难以解释的结果。拥有行政许可的洁净级实验动物中心，已构建细胞培养和实验平台，可分离培养数百种人、大小鼠和大型动物的原代细胞，并在此基础上提供相关细胞实验服务，包括细胞培养、细胞转染以及细胞药物刺激后各种增殖、侵染和凋亡实验。

兔肾上腺皮质细胞

培养信息：

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：梭形、多角形

传代特性：可传1-3代左右；2代以内状态最佳

消化液：0.25%胰蛋白酶

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

兔肾上腺皮质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

方法简介：

实验室分离的兔肾上腺皮质细胞采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：

实验室分离的兔肾上腺皮质细胞经3β-HSD免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

细胞简介：

兔肾上腺皮质细胞分离自肾上腺组织；肾上腺是机体相当重要的内分泌器官，由于位于两侧肾脏的上方，故名肾上腺。肾上腺左右各一，位于肾的上方，共同为肾筋膜和脂肪组织所包裹。左肾上腺呈半月形，右肾上腺为三角形。从侧面观察，腺体分肾上腺皮质和肾上腺髓质两部分，周围部分是皮质，内部是髓质。肾上腺内部是髓质部分，分泌肾上腺素和去甲肾上腺素。这些激素在应激状态释放增多，能够帮助升高血压，加快心率，升高血糖，动员全身的储备物质，为机体与外界环境的抗争作好充分准备。肾上腺外部是皮质部分，分泌醛固酮、皮质醇和少量的雌雄激素。醛固酮能够促进小便中尿钾的排出和尿钠的重吸收，正常数量的醛固酮，对维持机体正常血压有重要作用。但是如果过多分泌，会导致高血压和低血钾。皮质醇是机体必需的激素之一。当机体处于应激状态时，比如感冒，发烧，遇到突发事件的时候，肾上腺皮质分泌大量的皮质醇，这些皮质醇能够动员机体的存储能源，为应对内部或者外部重要事件提供充分的物质准备。当皮质醇缺乏时，机体在遇到重大事件的时候，往往缺乏足够应对能力，容易被病毒或外界压力所击倒。肾上腺产生的雄激素，对雄性来讲，并非必不可少，但是对雌性而言，是雄激素的一个重要来源。

贴壁细胞传代操作步骤：

用移液管或者巴氏吸管吸取培养液；

使用不含钙镁离子的平衡盐溶液（PBS）冲洗细胞1-2次；

弃PBS，加入胰蛋白酶-EDTA消化液（消化液浓度根据各细胞不同有调整），轻轻摇晃培养瓶，使胰酶与细胞表面充分接触，37 ℃孵育2-3 min，加入含血清完全培养基终止消化。

将细胞悬液移入离心管中，800 rpm-1000rpm离心5min，弃上清，加入预热的完全培养基重悬细胞，轻轻吸打混匀，吹打过程中尽量不要出现气泡。

细胞计数，根据细胞量选择合适的传代比例，最后转移置37 ℃细胞培养箱中进行培养。

 悬浮细胞传代操作步骤：

悬浮细胞由于本身在生长培养基中悬浮，无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离，整个过程较为迅速，对细胞损伤较小。悬浮细胞传代，通常有两种方法，直接传代法和离心传代法。

（1）直接传代法

①　悬浮细胞长满至80%-90%左右（细胞悬液变黄，最大细胞密度随细胞系不同而有所差异），即可传代；

②　用吸管吸弃细胞悬液1/2～2/3；

③　加入适量的新鲜培养基，继续培养。

（2）离心传代法

①　将细胞悬液转移到离心管内；

②　800 rpm-1000rpm离心5min，弃上清；

③　使用新鲜的培养基重悬细胞；

④　吸管吸取适量细胞悬液，装入新的培养瓶，再加入适量的新鲜培养基，继续培养。

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