MCF-7/Adr人乳腺癌阿霉素耐药细胞

‌细胞系与细胞株特性与应用‌：

细胞系：

细胞系可以连续传代培养，通常可以无限期地保持下去，具有无限繁殖能力。

细胞系在基础生物学研究、药物筛选、毒性测试等领域广泛应用，常用于探究细胞的生物学特性、疾病机制以及药物开发等方面。

著名的例子包括HeLa细胞系，它来自于1951年Henrietta Lacks的宫颈癌组织，被广泛用于医学研究，但也引发了一系列伦理和法律问题。‌

细胞株：

细胞株具有较高的同质性，细胞在传代培养的过程中能够保持较稳定的性状和功能。

细胞株常用于特定的实验或应用中，因为它们具有一些特定的生物学特性或标志，这些特性或标志在培养期间必须始终存在。

MCF-7/Adr人乳腺癌阿霉素耐药细胞

 商品介绍：

细胞名称：MCF-7/Adr人乳腺癌阿霉素耐药细胞

细胞特性

1）来源：人乳腺癌细胞耐药筛选

2）形态：上皮细胞样，贴壁生长

3）含量：>1×10^6  细胞数

4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5）用途：仅供科研使用。

细胞运输、保存及注意事项

复苏细胞

冻存细胞

包装

充液的T25细胞培养瓶

1mL冻存管

运输条件

常温

干冰

保存方式

37℃恒温细胞培养箱

-80℃冰箱中保存过夜后转入液氮

或立即复苏

※注意事项

1. 收到细胞后，若发现培养瓶破损、漏液及细胞有污染；或冻存管有破损，融化、漏液等，请立即拍照并联系我们。照片包括细胞培养瓶/冻存管外观，显微镜下细胞照片（100倍，200倍各2张）；

2. 若收到的复苏细胞有少量细胞脱落、飘起，可能由于运输途中导致。请先于37℃恒温细胞培养箱中静置2~3h后，再进行处理；

3. 复苏细胞的充液培养基为不含药物的维持培养基，血清浓度较低，收到细胞后请及时更换为培养基；

4. 建议收到细胞后，首先进行扩增（至少3代），并冻存部分细胞以备用。

5. 初次培养，当细胞汇合度达约80%时，可加入400ng/mL ADR的培养基培养至细胞融合后传代。细胞传代1~2次后仍能保持增殖，即可提高药物浓度至500ng/mL继续培养；若此过程中细胞停止增殖，且状态较差，则需降低药物浓度（首次降低一半药物浓度）或使用不含药物的培养基培养，至细胞汇合度达80%左右，且生长状态较好时，再更换为所需的ADR药物浓度。

6. 细胞冻存过程中，不可添加药物。

细胞培养试剂的配制

1）ADR药物的配制及保存

建议将ADR药物配制成1mg/mL的母液，即使用10mL PBS溶液溶解10mg ADR药物，使其溶解后，使用0.22um滤器过滤除菌。

注意：可根据用量配置药物，并将药物分装保存，避免反复冻融导致药物失效。溶解后的ADR，4℃保存1周，-20℃保存1个月，-80℃保存6个月。

2）冻存液的配制

90%优质胎牛血清+10%DMSO，现用现配。（冻存液中不含药物）

3）培养基的配制

成分

体积/浓度

优质胎牛血清

10%

双抗

1%

500ng/mL ADR

0.05%母液（1mg/mL）

RPMI-1640培养基

补充至所需体积

细胞培养条件

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%~80%。

细胞处理

1）冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4~6mL培养基的离心管中混合均匀，1000rpm/min离心3~5min，弃去上清液。加入1mL培养基重悬细胞后，均匀铺于含6~8mL培养基的培养瓶（或皿）中，置于37℃恒温细胞培养箱中过夜培养。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

注意：①细胞复苏过程中，不可使用含有药物的培养基。须在细胞生长至汇合度达80%左右时，方可添加400ng/mL ADR药物；若细胞生长状态较为缓慢，可适当降低ADR的浓度（首次降低一半药物浓度），或使用不含药物的培养基培养至细胞生长状态较好时，再更换为所需的ADR浓度。

②建议复苏细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩，避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸，造成人员伤害。

2）细胞传代（建议以同等底面积的培养瓶/皿按照1：2比例传代）

①待细胞密度达到80%~90%时，即可进行传代培养。

②弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1次，吸净残余的PBS。

③加入0.25％（w / v）胰dan白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化2~5min，显微镜下观察细胞细胞大部分变圆并脱落，即可轻拍培养瓶至细胞全部脱落。迅速拿回操作台，加入2倍体积的、含10%FBS的培养基中止消化。

④将细胞悬液移入离心管中，1000rpm/min离心5min，弃去上清液。

⑤向细胞沉淀中加入1~2mL培养基重悬细胞，轻吹混匀。将细胞悬液按1：1的比例均匀铺于2个新的培养瓶/皿中，添加6~8mL培养基。

注意：细胞传代1~2次后仍能保持增殖，即可提高药物浓度至500ng/mL继续培养；若此过程中细胞停止增殖，且状态较差，则需降低药物浓度（首次降低一半药物浓度）或使用不含药物的培养基培养，至细胞汇合度约80%，且生长状态较好时，再更换为所需的ADR药物浓度。

3）细胞冻存

①细胞冻存时，步骤同2）细胞传代的①~④，细胞计数后，加入配制好的细胞冻存液，重悬细胞，按照1×10^6 ~ 1×10^7个细胞/mL分配到一个冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

注意：细胞冻存过程中，不可添加药物。

②将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

参考资料(来源文献)

细胞系培养步骤：

‌细胞系培养‌的步骤主要包括细胞复苏、细胞传代和细胞冻存。

细胞复苏‌：

将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。

将融化的细胞移入离心管中，加入37℃预热的DMEM完全培养基中（其中胎牛血清约为10%），轻轻吹匀，离心，500g离心2min，弃上清液。加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，制成细胞悬液，接种于培养皿/瓶中，在含5% CO2的细胞培养箱中培养。

细胞传代‌：

当细胞密度达到80%~90%时，去掉完全培养基，用1X PBS清洗2次。

加入胰蛋白酶进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。

加入适量DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，吸取10微升进行计数，然后按照所需细胞量在含5% CO2的细胞培养箱继续培养。

‌细胞冻存‌：

当细胞密度达到80%~90%时，去掉完全培养基，用1X PBS清洗2次。

加入胰蛋白酶进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。

加入DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。

这些步骤确保了细胞的生长和繁殖能够在体外环境中得到有效的维持和扩展，为科学研究提供了大量的细胞样本‌。

‌细胞系培养‌的步骤主要包括细胞复苏、细胞传代和细胞冻存。

细胞复苏‌：

将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。

将融化的细胞移入离心管中，加入37℃预热的DMEM完全培养基中（其中胎牛血清约为10%），轻轻吹匀，离心，500g离心2min，弃上清液。加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，制成细胞悬液，接种于培养皿/瓶中，在含5% CO2的细胞培养箱中培养。

细胞传代‌：

当细胞密度达到80%~90%时，去掉完全培养基，用1X PBS清洗2次。

加入胰蛋白酶进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。

加入适量DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，吸取10微升进行计数，然后按照所需细胞量在含5% CO2的细胞培养箱继续培养。

细胞冻存‌：

当细胞密度达到80%~90%时，去掉完全培养基，用1X PBS清洗2次。

加入胰蛋白酶进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。

加入DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。

这些步骤确保了细胞的生长和繁殖能够在体外环境中得到有效的维持和扩展，为科学研究提供了大量的细胞样本‌

公司正在出售的产品：