A549+luc 人肺癌细胞荧光素酶标记

‌细胞系与细胞株特性与应用‌：

细胞系：

细胞系可以连续传代培养，通常可以无限期地保持下去，具有无限繁殖能力。

细胞系在基础生物学研究、药物筛选、毒性测试等领域广泛应用，常用于探究细胞的生物学特性、疾病机制以及药物开发等方面。

著名的例子包括HeLa细胞系，它来自于1951年Henrietta Lacks的宫颈癌组织，被广泛用于医学研究，但也引发了一系列伦理和法律问题。‌

细胞株：

细胞株具有较高的同质性，细胞在传代培养的过程中能够保持较稳定的性状和功能。

细胞株常用于特定的实验或应用中，因为它们具有一些特定的生物学特性或标志，这些特性或标志在培养期间必须始终存在。

A549+luc 人肺癌细胞荧光素酶标记

商品介绍：

细胞名称：A549+luc 人肺癌细胞荧光素酶标记

细胞特性

1） 来源：肺癌           

2） 形态：上皮细胞样，多角形；贴壁生长

3） 含量：>1×10⁶  细胞数       

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 

5） 用途：仅供科研使用

细胞诱导构建实验步骤：

1.  转染  （1）将A549细胞接种6孔板，每孔细胞数约为1×10⁵ 个，

（2）第二天，细胞融合度为50%左右时用于病毒转染，

（3）加入1mL培养基，再加20 μL Luciferase过表达慢病毒，

（4）混匀后继续培养，

（5）12h后观察细胞状态，并更换为新鲜培养基，

（6）当细胞长满板底后，传代至T25培养瓶中。

2.  筛选：用嘌呤霉素4ug/mL抗性筛选6周，稳转细胞记作A549+Luc。

3. 体外荧光素酶活性检测

取A549细胞消化，离心，弃上清，加20μL细胞裂解液，再加100μL荧光素酶底物，检测发光情况。

发光值

阴性

105

实验组

18995

结果表明慢病毒感染A549细胞能稳定表达荧光素酶。

运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。                      

一．细胞培养准备培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰dan白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

参考资料(来源文献)

细胞系培养步骤：

‌细胞系培养‌的步骤主要包括细胞复苏、细胞传代和细胞冻存。

细胞复苏‌：

将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。

将融化的细胞移入离心管中，加入37℃预热的DMEM完全培养基中（其中胎牛血清约为10%），轻轻吹匀，离心，500g离心2min，弃上清液。加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，制成细胞悬液，接种于培养皿/瓶中，在含5% CO2的细胞培养箱中培养。

细胞传代‌：

当细胞密度达到80%~90%时，去掉完全培养基，用1X PBS清洗2次。

加入胰蛋白酶进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。

加入适量DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，吸取10微升进行计数，然后按照所需细胞量在含5% CO2的细胞培养箱继续培养。

‌细胞冻存‌：

当细胞密度达到80%~90%时，去掉完全培养基，用1X PBS清洗2次。

加入胰蛋白酶进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。

加入DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。

这些步骤确保了细胞的生长和繁殖能够在体外环境中得到有效的维持和扩展，为科学研究提供了大量的细胞样本‌。

‌细胞系培养‌的步骤主要包括细胞复苏、细胞传代和细胞冻存。

细胞复苏‌：

将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。

将融化的细胞移入离心管中，加入37℃预热的DMEM完全培养基中（其中胎牛血清约为10%），轻轻吹匀，离心，500g离心2min，弃上清液。加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，制成细胞悬液，接种于培养皿/瓶中，在含5% CO2的细胞培养箱中培养。

细胞传代‌：

当细胞密度达到80%~90%时，去掉完全培养基，用1X PBS清洗2次。

加入胰蛋白酶进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。

加入适量DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，吸取10微升进行计数，然后按照所需细胞量在含5% CO2的细胞培养箱继续培养。

细胞冻存‌：

当细胞密度达到80%~90%时，去掉完全培养基，用1X PBS清洗2次。

加入胰蛋白酶进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。

加入DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。

这些步骤确保了细胞的生长和繁殖能够在体外环境中得到有效的维持和扩展，为科学研究提供了大量的细胞样本‌

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