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细胞基本属性
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商品介绍:
细胞名称:NK-92 MI人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞
细胞别称:NK-92 MI; NK-92 mi; NK92-MI; NK92MI; NK-92 transfected with MFG-Hil2
种属来源:人
年龄性别:50岁;男性
组织来源:外周血
生长特性:悬浮生长
细胞形态:淋巴母细胞样
背景简介:NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92MI细胞是转染得到的源自NK-92细胞的IL-2非依赖的NK细胞株。亲本细胞NK-92通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA进行转化。可能由于载体整合到基因组DNA中,转化是稳定的。这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性;铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞有以下特征:CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性;CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。其亲本IL-2依赖的细胞株NK-92细胞及另一株同样来源于NK-92细胞株的IL-2非依赖的细胞株NK-92CI都可从ATCC得到。NK-92MI细胞和NK-92CI细胞这两个变种都包含、表达并合成hIL-2cDNA。NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高,而亲本细胞不合成表达。1998年9月提交到ATCC的培养物污染了支原体,其后代通过BM细胞周期蛋白处理21天消除支原体。处理后6周,用Hoechst染色、PCR和标准培养测试进行支原体检测:,结果都呈阴性。
生物安全等级:2
细胞规格:1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测:无
基因表达情况:
保藏机构:ATCC; CRL-2408
培养基:NK-92MI培养基:
培养条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件:无血清冻存液,液氮储存
![6.jpg 6.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/0328214d-fb28-49a5-8177-1e64a5ea58a5.jpg)
细胞培养操作:
1) 复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
3) 细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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培养注意事项:
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象 发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由 客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。
4. 贴壁细胞可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞,再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,,用新鲜的完全培养基重悬 细胞,并接种到新的培养瓶或培养皿中,置于培养箱中进行培养。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞 的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
8. 备注:运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议 1:2 传代 。
9. 注意: 1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。
NK-92 MI人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞信息由上海博湖生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于NK-92 MI人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应NK-92 MI人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞外,上海博湖生物科技有限公司还可为您提供PANC-1人胰腺癌细胞、KTC-1人甲状腺癌细胞、Panc 03.27人胰腺癌细胞等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。