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Flavobacterium spp.黄杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

供货周期: 14天
品牌: 雅吉生物
规格: 1盒
型号: 50次/盒
货号: 1516500
有效期: 12月
标准值: 详见说明
报价: ¥3990
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产品介绍

本产品仅供科研

更多产品详细信息可免费向客服索取

产品名称:Flavobacterium spp.黄杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板。

2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。

3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4. 特异性高,不会跟其他微生物的 DNA 发生交叉反应。

5. 既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为 5个数量级。

6. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。

7. 本产品只能用于科研。

包装规格及成分(具体信息详见说明书):

编号

成分

规格

试剂一

探针法qRT-PCR缓冲液500μL

试剂二

探针法qRT-PCR酶混合液50μL

试剂三

 荧光PCR专用模板稀释液1mL

试剂四

PCR引物-探针干粉50T

试剂五

PCR阳性对照(107拷贝/μL)50μL

Flavobacterium spp.黄杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒操作过程:

一、稀释标准曲线样品(以 10E1-10E6 拷贝/μL 这6 个10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA 片段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2,1。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同。

3. 在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头,在 4 号管中加入 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品待提取,最好设置 N+2 个提取,多出的是PC(样品制备阳性对照)和 NC(样品制备阴性对照)。可以取阳性对照的1000倍稀释液10μL 再加上一定量的水,使总体积与待提取样品的规定体积一致,以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。

三、设置qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)

如果进行定量分析,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线样品。如果做定性分析,则6个标准曲线样品只选一个做(可以选4号,其余样品不变)。以下只介绍定量分析的反应设置。

四、数据处理

1. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log 值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品核酸浓度的 log 值,再推算出其浓度。

2. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲

线,Ct 值应该小于或等于 39。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于40 则为阴性,如果小于或等于 39 则为阳性。如果在 39-40 之间,

则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性。

    成分样品管N+2RT-PCR阴性对照管标准曲线样品管
    2-7 管)
    探针法qPCR缓冲液各 10 μL10 μL各 10 μL
    探针法 qPCR 酶混合液各 2 μL2 μL各 2 μL
    qRT-PCR探针各 1 μL1 μL各 1 μL
    探针qRT-PCR
    引物混合液
    各 2 μL 2 μL各 2 μL
    待测样品 RNA 模板各 5 μL----
    超纯水--5 μL--
    第 7 步所得标准曲线样品稀释液(2-7 号)----各5 μL(2号样到2号管,3号样到3 号管…)
    1. 盖上盖子后上机,按下面参数进行 qRT-PCR:

    过程温度时间
    逆转录50℃30 min
    预变性94℃10 min
    qRT-PCR 反应(40 个循环)94℃15 sec
    60℃1 min(采集 FAM 通道的荧光信号)

保存条件:-20℃

保质期:12个月

Flavobacterium spp.黄杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒检测方法的局限性

A.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

B.样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

C.阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

D.病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

E.不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

F.试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

Flavobacterium spp.黄杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒注意事项

1操作严格按照说明书进行;

2试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;

3反应液应避光保存;

4反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

5使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

6样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

7实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

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工商信息

企业名称

上海雅吉生物科技有限公司

企业信息已认证

企业类型

有限责任公司(国内合资)

信用代码

91310112572709963N

成立日期

2011-04-17

注册资本

经营范围

从事生物科技、化工科技领域内的技术开发、技术转让、技术咨询、技术服务,电子商务(不得从事增值电信、金融业务),实验室设备、无尘室设备、仪器仪表、化工原料及产品(除危险化学品、易制毒化学品、民用爆炸物品、烟花爆竹、监控化学品)、一类医疗器械销售.[依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动)

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