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上海雅吉生物科技有限公司

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猪伪狂犬病毒野毒株（gE基因）探针法荧光定量PCR试剂盒Pseudorabies Virus（PrV）

供货周期： 14天

品牌：雅吉生物

规格： 1盒

型号： 50次/盒

货号： 1536311

有效期： 12月

标准值：详见说明

报价： ¥3990

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产品介绍

本产品仅供科研

更多产品详细信息可免费向客服索取

产品名称：猪伪狂犬病毒野毒株（gE基因）探针法荧光定量PCR试剂盒Pseudorabies Virus（PrV）

1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。

2.引物等组分经过优化，灵敏度高。

3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4.特异性高，引物是根据高度保守区设计，不会跟其他的DNA/RNA发生交叉反应。

5.既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。

6.本产品足够50次20μL体系的染料法荧光定量PCR反应。

7. 本产品只能用于科研。

包装规格及成分（具体信息详见说明书）：

编号	成分	规格
试剂一	探针法qRT-PCR缓冲液	500μL
试剂二	探针法qRT-PCR酶混合液	50μL
试剂三	荧光PCR专用模板稀释液	1mL
试剂四	PCR引物-探针干粉	50T
试剂五	PCR阳性对照(10⁷拷贝/μL)	50μL

猪伪狂犬病毒野毒株（gE基因）探针法荧光定量PCR试剂盒Pseudorabies Virus（PrV）操作过程：

一、稀释标准曲线样品（以 10E1-10E6 拷贝/μL 这6 个10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA 片段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2，1。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同。

3. 在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在 4 号管中加入 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品待提取，最好设置 N+2 个提取，多出的是PC（样品制备阳性对照）和 NC（样品制备阴性对照）。可以取阳性对照的1000倍稀释液10μL 再加上一定量的水，使总体积与待提取样品的规定体积一致，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。

三、设置qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）

如果进行定量分析，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。如果做定性分析，则6个标准曲线样品只选一个做（可以选4号，其余样品不变）。以下只介绍定量分析的反应设置。

白试剂盒.png

四、数据处理

1. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log 值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品核酸浓度的 log 值，再推算出其浓度。

2. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 39。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于40 则为阴性，如果小于或等于 39 则为阳性。如果在 39-40 之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。

盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR（具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化）。

过程	温度	时间
逆转录	50℃	10min.
预变性 PCR反应 (40个循环)	95℃	10min.
	95℃	15sec.
	60℃	60sec(采集FAM通道的荧光信号，淬灭基团为NFQ)

猪伪狂犬病毒野毒株（gE基因）探针法荧光定量PCR试剂盒Pseudorabies Virus（PrV）注意事项

1操作严格按照说明书进行；

2试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；

3反应液应避光保存；

4反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

5使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

6样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

7实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

8试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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工商信息

企业名称

上海雅吉生物科技有限公司

企业信息已认证

企业类型

有限责任公司(国内合资)

信用代码

91310112572709963N

成立日期

2011-04-17

注册资本

经营范围

从事生物科技、化工科技领域内的技术开发、技术转让、技术咨询、技术服务,电子商务(不得从事增值电信、金融业务)，实验室设备、无尘室设备、仪器仪表、化工原料及产品(除危险化学品、易制毒化学品、民用爆炸物品、烟花爆竹、监控化学品)、一类医疗器械销售.[依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动)

联系方式

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公司地址

上海市松江区新镇街1111号1A幢211室

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