疏水层析填料

疏水层析简介

疏水作用层析是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质或多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。选择疏水作用层析填料的关键在于选择合适疏水强弱的配基，若蛋白质的疏水性较强就需要选择较弱的疏水填料，反之亦然。为了增强蛋白质和疏水填料的结合需要在缓冲液中加入一定量的盐(通常是硫酸铵)。若蛋白质本身的疏水性质较强，就不需要加太多的盐，为了提高分辨率可以选择颗粒较小的疏水作用填料。

影响疏水作用的因素

• 盐种类及浓度 

组成缓冲液中盐的某些离子对蛋白质的构象有稳定作用，如SO4 2-可提高蛋白结构的稳定性，使蛋白的溶解度下降， 对蛋白有盐析效应，使蛋白同配基间疏水作用增强。还有些离子对于蛋白质构象具有不稳定作用，如Cl-、Ca2+可增加蛋白质的溶解度，这类离子洗脱能力较强。盐析和盐溶的特性可作为选择疏水填料平衡和洗脱条件的依据，常用的疏水作用离子排列如下： 

霍夫迈斯特序列，离子促变序列 

←盐析效应递增 

阴离子：PO4 3-、SO4 2-、CH3COO-、Cl-、Br-、NO3-、ClO4-、I-、SCN

阳离子：NH4 +、Rb+、K+、Na+、Cs+、Li+、Mg2+、Ba2+

→盐溶效应递增 

增加盐析效应增强疏水作用；增加盐溶效应减弱疏水作用。 

硫酸铵因其溶解度高、可溶性强而最为常用。 

• 温度 

疏水层析过程中，温度升高，生物大分子的构象发生变化，疏水作用增强，有利于提高层析柱的分离度，但对生物活性物质来说，高温条件会使其变性失活，因此疏水层析通常在常温或低温中进行，建议在恒温条件下进行疏水层析，避免温度的变化对于层析结果的影响。 

• pH 

疏水层析流动相的pH通常为中性的磷酸盐缓冲液。蛋白质同疏水基团的作用力随 pH升高而降低，因为蛋白质的酸性基团随pH升高所带电荷逐渐增多，亲水性增强。但在疏水层析中通常不采用改变溶液的pH来改变蛋白质的疏水 性。 

常见疏水作用层析配基的疏水性强弱顺序如下：

 Butyl-S(丁硫基)

博格隆有各种类型的疏水层析填料，包括Bestarose FF 快流速琼脂糖基架疏水层析填料及预装柱、Bestarose HP 高分辨率琼脂糖基架疏水填料及预装柱、Diamond 高刚性琼脂糖基架疏水填料及预装柱、Diamond Mustang 高分辨率刚性琼脂糖基架疏水填料及预装柱等。