SD大鼠骨髓间充质干细胞

收货后处理方法

收到细胞后请检查包装是否完整，干冰是否充足，冻存管有无破损，并核对管身标签信息和数量，确认是否与装箱单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。如不立即进行实验，请将细胞放至-80℃或液氮中保存。

产品描述

SD大鼠骨髓间充质干细胞取自SD大鼠的骨髓，经检测，确保细胞无细菌、真菌、支原体和病毒污染，表达多种间充质干细胞特异性表面标记，具有良好的增殖和分化潜能，经定向诱导，可分化为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞等。

冻存代次： P2

培养体系： SD 大鼠骨髓间充质干细胞专用培养基

换液时机： 发现有比较多的死细胞或培养基颜色较黄时，应换液。一般为每 2-3 天换液

传代比例： 一般为 1:2

传代周期： 细胞汇合度达 80%~90%时，可进行传代，一般为 48~72 h，不可让间充质干细胞完全融合或过度融合，以免发生生长接触抑制，影响细胞的生长状态。

培养条件： 气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃

冻存条件： 一步冻存液 One Step Freezing Medium

NOTE：该产品仅供科研，不可用于临床治疗等其他方面。

SD BMSCs 的复苏

1) 实验前开启水浴锅预热完全培养基。

2) 在工作台中准备好 15 mL 离心管加入 5 mL预热后的完全培养基。

3) 从-80°C 冰箱中取出冻存管，将冻存管置于37℃水浴锅内，快速摇动解冻直到内容物融化，同时需注意避免水面没过管口。

NOTE：建议将液氮中的细胞提前取出置于-80°C 待液氮挥发后复苏。

4) 对冻存管外壁进行常规消毒后，在工作台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至 15 mL 离心管内。使用 1 mL 培养基清洗冻存管内壁，一并收集至 15 mL 离心管内。

5) 250 g 离心 5 min，收集细胞沉淀，弃掉上清并加入 2 mL 完全培养基重悬（如有台盼蓝可取少量进行染色计数）。

6) 将重悬后的细胞接种至 T25 或同等底面积器皿，“划十字”摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布。把细胞放入 37°C，5%CO2，饱和湿度的培养箱中培养。

7) 24h 后镜下拍照观察，换液后继续培养。如有异常情况，请及时与我们联系。SD BMSCs 的传代

1) 预热 1×PBS、胰酶和完全培养基。

2) 吸去原培养基。用 1×PBS 洗涤细胞 2~3 次。

3) 吸去 1×PBS。加入胰酶。轻轻旋转，使胰酶覆盖细胞表面，消化，显微镜下观察约70%~80%左右的细胞变圆后，用手轻拍培养器皿外壁使细胞脱壁。

4) 当观察到细胞明显脱落，立即加入预热的完全培养基终止消化。用吸管吸取液体，反复轻柔吹打培养器皿底壁，使细胞彻底脱离器皿底壁。

NOTE：建议可添加 2 倍胰酶用量的完全培养基用于终止消化。

5) 将细胞悬液转移到离心管中。用 1xPBS 清洗底壁，收集细胞悬液至离心管中。

6) 250 g 离心 5 min。

7) 小心弃去上清液，加入 1~2mL 完全培养基重悬细胞。

8) 选择合适的培养器皿，加入适量完全培养基，按照合适的传代比例（一般为 1:2）接种细胞，“划十字”摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布。

9) 把细胞放入 37°C，5%CO2，饱和湿度的培养箱中培养。

SD BMSCs 的冻存

1) 待细胞生长至可传代的汇合度，即可消化准备冻存。

2) 消化细胞，取少量细胞悬液计数。细胞悬液经250 g离心5 min。

3) 小心弃掉上清。用4°C预冷的冻存液重悬细胞，一般冻存密度为1×10^6个/mL。

4) 对冻存管进行标识后，把细胞分装到冻存管中，旋紧冻存管盖。

5) 如使用一步冻存液，冻存管直接竖直放入-80°C冰箱即可。

如使用程序冻存液，需将冻存管放入程序降温盒后方可放入-80°C冰箱。

6) 24小时后可将细胞转移到液氮进行长期保存。