人间充质干细胞无血清培养基

人间充质干细胞无血清培养基，经筛选配比的无血清添加物及其他辅助成分。该产品适用于人间质干细胞无血清条件的培养；可维持人间质干细胞良好的增殖速率，并保持良好的分化能力。

实验数据：

1.使用的间充质干细胞无血清培养基培养间充质干细胞，细胞表型如何？ 

用流式细胞仪检测细胞表面抗原：CD19(0.35%)、CD34(1.23%)、CD45(1.08%)呈阴性表达；CD90(99.94%)、CD105(97.02%)呈阳性表达。

2.通过脐带组织贴块法分离间充质干细胞需要几天？

7-10天，可见细胞爬出；第14天，细胞可传代；之后，每2-3天细胞可传代一次。

【产品用途与描述】

间充质干细胞无血清培养基可用于多种来源的人类间充质干细胞的原代细胞分离及细胞传代培养，同时还能保持其多向分化的潜能，如人骨髓间充质干细胞（BM-hMSC)、人脂肪间充质干细胞（AT-hMSC）、人脐带间充质干细胞（UCM-hMSC）等。

使用本产品无需添加血清或血清替代物。

间充质干细胞无血清培养基化学成分明确、无血清、无动物源成分。产品批间差异小，非常适用于培养哺乳类干细胞，包括脐带干细胞，骨髓干细胞，脂肪干细胞等间充质干细胞。产品严格无菌，无病毒和支原体，性能稳定，使用该培养基能使干细胞在理想营养平衡状态下进行多代扩增而不发生分化（10代以内）。

【产品特点】

1、可维持人类间充质干细胞良好的增值速率；

2、保持良好的分化能力；

3、经过微生物检测（细菌、真菌、霉菌及支原体）、PH检测、渗透压和内毒素检测；

4、不含任何动物源的蛋白成分。

【产品规格与保存】

【产品稳定性】

1、所有的产品都需要避光保存；

2、所有产品一旦超过标签注释的有效期，必须放弃使用；

3、配制成完全培养基后，避光保存在2~8℃可存放3-4周；

4、为了更好的使用效果，请勿对试剂进行反复冻融。 

【产品主要成份】

间充质干细胞无血清培养基的主要组成成分：氨基酸，维生素、无机盐、白蛋白，转铁蛋白、胰岛素、微量元素等。

【产品使用方法】

1、人间充质干细胞完全培养基准备

将间充质干细胞无血清生长添加剂(MSCGs)在2-8℃过夜融化，按1:100比例加入基础培养基中，即成为间充质干细胞完全培养基。

温馨提示：间充质干细胞完全培养基2~8℃避光条件下，可保存30天。若小量、多次使用，建议您将间充质干细胞无血清生长添加剂(MSCGs)分装后，保存于-5~-20℃冰箱，可避免培养基不必要的浪费。 

2、人间充质干细胞复苏（以T-75瓶为例）

①从冰箱中取出完全培养基，在生物安全柜或超净台中吸取适量（如T-75瓶：10-15mL)完全培养基沿上表面加入间充质干细胞培养瓶中，切勿冲到细胞培养瓶底面，即：细胞生长面。然后慢慢将细胞培养瓶平放，在37℃、恒温CO2培养箱中放置5-10分钟后使用。

温馨提示：请严格按照此步骤操作，否则可能会出现细胞培养瓶中细胞生长空白区域，即所谓的“生长空洞”。多数用户使用的不是专用的预包被细胞培养瓶，而是普通的细胞培养瓶或培养皿，其表面环境并不利于无血清培养环境下的间充质干细胞贴壁。37℃放置5-10分钟，可让培养基中的促贴壁物质更好地与细胞培养瓶底部结合，使得间充质干细胞的贴壁能力增强，降低“生长空洞”出现的概率。

②从液氮中取出冻存的间充质干细胞，迅速将冻存管放入37℃水浴中，快速融解。

温馨提示：尽可能避免水没过管帽，以减少污染的风险；要快速完成细胞复苏过程（尽量控制在1分钟内），融化过程时间过长，会造成复苏后细胞活性较差。

③用70%-75%酒精消毒冻存管外壁，在生物安全柜或超净台中打开冻存管，用吸管/移液器将细胞冻存悬液缓慢移入装有5-10mL细胞完全培养基的15mL离心管中（在这一过程请尽可能避免产生气泡）。

温馨提示：为了减少细胞损失，往细胞冻存管中加入1mL完全培养基，稍微吹打，用吸管/移液器将这1mL的细胞悬液吸入离心管中，再用吸管/移液器将离心管中的细胞轻轻吹打混匀。

④1200rpm离心5min，弃上清，加入2mL完全培养基重悬细胞，台盼蓝染色计数，按密度2×10⁴cells/cm²将细胞接种至步骤①中孵育完的细胞培养瓶中，添加细胞时，将细胞培养瓶竖立，细胞悬液直接加到底部，切忌冲到细胞培养瓶底面。

⑤轻轻摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布，混匀后，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中静置培养。

⑥24h后，更换新鲜的完全培养基（温育至37℃）。

3、人间充质干细胞传代（以T-75瓶为例）

①在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到80-90%，即可传代。

温馨提示：细胞融合度请勿超过90%。很多传代后的细胞大比例死亡，是由于传代前细胞生长过密（融合度过高），导致细胞消化异常（细胞整片或成片脱落），加之随后的不当操作（如用移液器反复吹打成片细胞使其成为单个细胞），此机械损失过程会严重损害细胞膜，引发大比例的细胞死亡；间充质干细胞经冻存后再次使用时，尤为明显。

②预处理细胞培养瓶，处理方法同细胞复苏中的步骤①。

③在生物安全柜或超净台中，弃去细胞培养瓶中的培养液，加入5-10mL PBS清洗细胞后弃去，再加入2mL 0.05%胰酶-EDTA消化细胞。

④在显微镜下观察到细胞变圆时，立即加入5mL胰酶抑制剂终止消化。

⑤用移液器轻轻吹打瓶壁上还未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。

⑥将细胞悬液转移至15mL离心管中，1200rpm离心5min。弃上清，加入2mL细胞完全培养基重悬细胞，台盼蓝染色计数，按细胞密度2×10⁴cells/cm²，将细胞接种至细胞传代②步骤中孵育完的细胞培养瓶中，添加细胞时，将细胞培养瓶竖立，细胞悬液直接加到底部，切忌冲到细胞培养瓶底面。

⑦轻轻摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布，混匀后，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中静置培养。 

4、人间充质干细胞冻存

①用0.05%胰酶-EDTA消化待冻存的细胞，加入胰酶抑制剂终止消化并离心，重悬后进行细胞计数。

②1200rpm离心5min，弃上清。

③根据细胞计数情况，缓慢加入适量冷的无血清冻存液（无血清冻存液可即拿即用或置于冰袋备用），调整细胞密度在1×10⁶cells/mL左右。

④轻轻地重悬细胞，将重悬均匀的细胞按等份加入到灭菌的冻存管中（需提前做好标记），旋紧冻存管盖。

⑤迅速将冻存管放入程序降温盒中，然后将冻存盒直接放入-80℃冰箱。

⑥过夜放置后，将细胞从-80℃冰箱转移至液氮罐中长期保存。