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核心参数
规格: 50 test,20 test
货号: GE-19001-20 | GE-19001-50
在包装重组病毒的过程中,质粒转染是影响病毒包装效果的重要一步。本试剂盒是基于CaPO4法开发的病毒包装试剂盒,在293T细胞中有非常好的转染效果。CaPO4法最初是作为检测病毒DNA传染性的一种技术而发展起来的,由CaPO4形成的沉淀通过增强DNA对细胞膜的吸附作用,促进哺乳动物细胞对DNA的摄取,从而达到转染的目的。CaPO4沉淀还限制了哺乳动物细胞内DNA酶对DNA的消化。本试剂盒包含能够快速、简便、高效地对293T细胞进行质粒转染的必要试剂,可同时用于慢病毒和逆转录病毒的包装,可在100mm培养皿中进行20-50次转染。Solution 1和Solution2用于形成CaPO4沉淀;Solution3为本公司生产并经严格筛选的胎牛血清,用于病毒包装过程中添加到细胞培养基中;Solution 4为病毒包装增强试剂,可有效提过病毒包装效率;Solution 5为病毒感染增强试剂,用于靶细胞感染;Controlplasmid为EGFP慢病毒质粒,用于包装阳性对照病毒。产品特点►操作简单、快速、高效产品成分
试剂名称
内容
规格
储存
条件
-20T
-50T
Solution 1
2.5M CaCl2
2ml
5ml
-20℃
Solution 2
2×BBS
10ml
25ml
Solution 3
Modified Fetal bovine serum
Solution 4
Packaging Enhancer (1000×)
100μl
250μl
Solution 5
Infection Enhancer (1000×)
Controlplasmid
CMV-EGFP
40μg
UltrapureH2O
H2O
4℃
注:Solution 1、Solution 2应避免反复冻融,请根据实验情况分装使用。其他所需材料超纯水293T (Acme-293T,东岭生物)DMEM高糖培养基Fetal bovine serum (FBSV500,东岭生物)磷酸盐缓冲液 (PBS: 137 mM NaCl, 2.6 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 1.8 mM KH2PO4, Adjust the pH to 7.4 with HCl)操作流程病毒包装 1.提前一天消化293T细胞,重悬于37℃预热的DMEM完全培养基中(10%FBS,无抗生素,以下简称为D10),计数; 2.每个培养皿接种4.5×10^6细胞,10mlD10,轻轻晃动,将细胞完全混匀; 3.在含5%CO2培养箱中37℃培养过夜(转染前细胞密度应达到60%-70%,可根据细胞生长速度对细胞接种量作调整); 4.转染前3h配制含有2.5% Solution 3的DMEM培养基(以下简称为D2.5,不含双抗),37℃预热备用; 5.转染前2h吸去培养皿中培养基,每皿更换7ml上一步预热的D2.5,放入培养箱中备用,注意避免细胞脱落; 6.准备涡旋仪,70%酒精擦拭消毒后置于无菌操作台备用; 7.根据下表准备DNA混合液(该体系以慢病毒包装载体pMD2G和psPAX为例,为1个100mm培养皿用量):
试剂
用量
pMD2G
6μg
PSPAX
15μg
慢病毒表达载体
20μg
8.边涡旋边逐滴加入50μl Solution 1,以充分混匀;注:以上所用试剂均需恢复至室温,阳性对照组用CMV-EGFP代替慢病毒表达载体。 9.在15ml离心管中准备等体积500μl Solution 2,在涡旋仪上快速涡旋,同时逐滴加入配制好的DNA混合液(该过程必须逐滴加入);滴加结束后再涡旋5-10s;注:因Solution 2 pH对温度非常敏感,必须恢复至室温后使用。 10.将混合液室温孵育20min; 11.同时,在待转染细胞培养皿中加入8μl Solution 4,混匀后放于培养箱备用; 12.孵育结束后用移液枪或移液管轻轻混匀混合液,此时可见混合液略有浑浊;注:混匀一定要轻柔,可通过吹泡泡(bubble mix)的方式混匀。 13.将混合液逐滴均匀滴加至培养皿中,前后左右轻轻晃动培养皿,充分混匀; 14.将培养皿放于含3%CO2培养箱中培养; 15.12-16h之后(不超过16h),37℃预热DMEM无血清培养基(可用PBS代替)和D2.5; 16.吸去培养皿中培养基,用预热的DMEM无血清培养基轻轻洗2次,10ml/次,之后加入10ml上步预热的D2.5,混匀后置于含5%CO2培养箱中37℃培养; 17.转染36-48h后收集培养上清,2200rpm,4℃离心10min去除细胞碎片,置于4℃冰箱短期保存(不超过2天),或分装后于-80℃长期保存。注:冻存的病毒应在冰上或4℃解冻,且避免反复冻融。 18.收集的病毒上清可直接用于滴度测定,或浓缩后分装保存; 本公司同时提供病毒浓缩试剂(货号:GE-19002-50),可方便快捷高效地浓缩病毒,不需要超速离心机。
BeNano 90 纳米粒度仪
安东帕Anton Paar粘度计SVM 1001
ZR-1620型 尘埃粒子计数器
普析通用PF5系列原子荧光光度计
企业名称
上海乐赛生物科技有限公司
企业信息已认证
企业类型
信用代码
91310000MA7H8C6R4D
成立日期
2022-02-22
注册资本
1000
经营范围
公司地址
苏州工业园区月亮湾路10号慧湖大厦B座 907
客服电话
96孔黑色PP酶标板
Real-titer慢病毒滴度测定(Q-PCR)试剂盒
PEGeasy 病毒浓缩试剂
PEI转染试剂
Acme-packaging病毒包装试剂盒
CRISPR/Cas9 sgRNA质粒载体
CRISPR/Cas9基因编辑试剂盒(质粒)
RPMI 1640 培养基
MEM培养基
MEM Alpha 改良版培养基
IMDM改良培养基
DMEM/F-12 1:1培养基
DMEM,基础培养基
CL胎牛血清
特优级胎牛血清
血清移液管
低吸附吸头
PC方形储液瓶
外旋式SBS冻存管
15ml/50ml尖底离心管
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公司名称: 上海乐赛生物科技有限公司
公司地址: 苏州工业园区月亮湾路10号慧湖大厦B座 907 联系人: Susan 邮编: 215000
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