免疫荧光染色|七色多重荧光染色试剂盒 （六标七色）

     免疫荧光染色|七色多重荧光染色试剂盒 （六标七色） 

      原理介绍:酪酰胺信号放大(TSA，Tyramidesignalamplification)技术是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的DAB显色方法，TSA技术同样采用HRP标记的二抗，同样有对应的“显色”步骤（HRP催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP复合物，重复下一种一抗-hrp二抗来第二轮孵育，换另一种酪胺荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。
       TSA详细原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H202下形成共价键结
       合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与周围的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，结果使其检测信号得到10-100倍增强。简单来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP（而不是直接偶联荧光素），来催化后续添加入体系的非活性荧光素。荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。再换个一抗来第二轮孵育，周而复始。等到所有抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最后去检测结果。由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担心抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。也就是说，如果用TSA技术，同一张片子上所有的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以进行实验，而且信号放大的倍数大大增强。本公司开发的试剂盒具体酪胺荧光染料为以下其中一种或者多种：480，520，570，620，690，780。此试剂盒中的荧光染料可单独或配合使用。可以实现单标、双标、三标以及更多重荧光放大/多重同源抗体荧光标记等功能，极大丰富了此试剂盒的内涵。
       试剂盒组成：480荧光染料(即用型，5mL),-20℃；520荧光染料(绿光)(即用型，5mL),-20℃；570荧光染料（红光）(即用型，5mL)，-20℃；-620荧光染料(即用型，5mL)，-20℃；690荧光染料(即用型，5mL)，-20℃；780荧光染料(即用型，5mL)，-20℃；TSA+增强剂，100ul，-20℃（可选）；
       高敏多聚hrp山羊抗兔二抗（20mL）4℃。
       备注：480荧光染料、520荧光染料、570荧光染料、620荧光染料、690荧光染料、780荧光染料在-20度下，均为固体，使用之前需解冻。
       TSA+增强剂使用方法：TSA+增强剂能够进一步增强荧光信号放大液的放大信号5-10倍，TSA+增强剂：荧光放大液=1:500，使用TSA+增强剂不是必须的选项，可以根据具体的情况选择添加或者不选择添加。
       操作流程：
     

  1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ。取出放在通风厨内，酒精晾干后放入自来水中稍洗，蒸馏水洗。
       2、抗原修复：组织切片置于盛满PH9.0EDTA碱性抗原修复液或者PH6.0柠檬酸修复缓冲液的修复盒中于微波炉内进行抗原修复（也可以用高压1-2min100度水煮15min95度水浴20min等其他</spa