柱式血液DNA提取试剂盒（柱式血液DNAout）

柱式血液DNA提取试剂盒（柱式血液DNAout）

产品及特点 

本试剂盒适用于各种新鲜及抗凝剂（柠檬酸钠、EDTA 等）处理过的全血基因组 DNA 提取。无需去除红细胞，直接裂解血细胞，DNA 特异吸附到硅胶膜上，通过简单漂洗去除杂质，可快速纯化得到基因组 DNA。使用本试剂盒得到的血液基因组 DNA 无蛋白、核酸酶污染，可直接进行 PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。它具有下列特点：

1. 适用范围广：可从抗凝血、白膜层和禽类血等样品中直接提取 DNA；

2. 操作简便：无需有机试剂沉淀，可快速获得高纯度的血液基因组 DNA；

3. 纯度高：去除污染物和抑制剂彻底，便于下游应用。

规格及成分

运输及保存 蛋白酶 K 于-20℃，其他组分室温（15 ~ 25℃），可保存 12 个月。

自备试剂 

无水乙醇、RNase A（可选）。

（注意：使用前请先在缓冲液 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇）

使用方法

1. 在 1.5 ml 灭菌离心管中加入 20 μl Proteinase K，200 μl 哺乳动物鲜血

或抗凝血。

（注意：如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量 5-15 μl，可加缓冲液 PBS 或生理盐水补足 200 μl 后进行下面的裂解步骤，如要去除 RNA，可加入 4 μl RNase A(100 mg/ml)，混匀，静置 5 min）

2. 加入 200 μl Buffer GL，涡旋混匀 15 sec，56℃水浴 10 min。

（注意：期间每隔一段时间震荡离心管，至溶液变得清亮）

3. 加入 200 μl 无水乙醇，充分震荡，短暂离心以去除管盖内壁液体。

4. 将吸附柱放入收集管，将上一步所得溶液全部加入吸附柱中，12,000 rpm 离心 1 min，弃收集管中滤液。

5. 向吸附柱内加入 500 μl Buffer W1，室温 12,000 rpm 离心 30 sec，弃收集管中滤液。

（注意：按要求在 Buffer W1 中加入无水乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）

6. 向吸附柱内加入 600 μl Buffer W2，室温 12,000 rpm 离心 30 sec，弃收集管中滤液。

（注意：Buffer W2 是浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）

7. 向吸附柱内加入 500 μl Buffer W2，室温 12,000 rpm 离心 30 sec，弃收集管中滤液。

8. 干燥。将离心吸附柱于 12,000 rpm 离心 2 min，甩干残留漂洗液。

（注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响基因组 DNA 的后续使用）

9. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管（自备）中，加入 50 ~ 100μl Buffer EB，室温放置 2 min，12,000 rpm 离心 1 min，离心管底溶液即基因组 DNA。

（注意：为增加洗脱效率，可将洗脱液 Buffer EB 在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用 NaOH 调整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之间，为了增加回收率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置 2 min，再次离心收集）

注意事项

如 Buffer GL，Buffer W1 产生沉淀，可在 56℃水浴溶解；

样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段小，提取量下降；

所有离心步骤均为台式离心机，室温下操作；

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！