一站式 Tricine-SDS-PAGE 电泳套装

一站式 Tricine-SDS-PAGE 电泳套装

产品及特点 Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)是目前电泳法 变性分离多肽的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此开 发了本产品。它具有下列特点:

1. 一站式，提供除水和样品以外的所有成分。

2. 即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。

3. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。

4. 电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验。

规格及成分

运输及保存 常温运输和保存（上样液需要-20℃保存），保存期为一年。

自备试剂 Milli-Q 纯水或同等级别的去离子水、水饱和的异丁醇

使用方法 本公司强烈推荐在分离多肽时使用由 4%浓缩胶、10%隔离胶和 16%分离 胶从上到下组成的三层 Tricine-SDS-PAGE 胶，下面为配制该胶的流程。如 果用户不需要隔离胶或需要调整各种胶的浓度，请按比例修改。

1. 配制 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液（19：1）(丙烯酰胺-甲叉双丙 烯酰胺溶液简称 AB 溶液，下同): 直接在装有 60 克丙烯酰胺和 3 克甲叉 双丙烯酰胺的瓶中加入 140 mL 自备的去离子水，拧紧瓶盖后 37℃水浴， 其间颠倒摇晃多次，直到干粉全部溶解，得到 30% AB 溶液（19：1）， 该溶液最好 4℃避光保存，在一个月内用完。AB 溶液具有神经毒性，一 定要戴手套操作。

2. 配制 10%的 APS（过硫酸铵）：按每 0.1 克过硫酸铵干粉加 1 mL 去离子 水的比例将去离子水加到装有硫酸铵干粉的 1.5 mL EP 管中，摇晃到粉 末全部溶解。配制好的 10%的 APS 溶液可在 4℃存放一周。过硫酸铵极 其容易吸潮，没用完的过硫酸铵一定要拧紧盖子。如果吸潮，可用自备的 分析纯过硫酸铵替代。

3. 配制 30 mL 16%分离胶和 9 mL 10%隔离胶（足够灌两块 0.75 mm× 14 cm×14 cm 胶）。

A) 标记 2 个 50 mL 的三角瓶，按下表的用量加入各成分：

B) 混匀后真空脱气 10-15 分钟。

C) 灌分离胶：在分离胶瓶中加入 150 uL 10%的 APS 溶液和 30 uL TEMED 溶液，轻轻旋转混匀。用吸管将分离胶溶液沿着一个隔条的 边缘加到玻璃板夹层中，直到溶液的高度距离玻璃上沿还有 5 cm。 由于分离胶比重比隔离胶大，故可在其凝固前直接灌隔离胶。

D) 灌隔离胶：在隔离胶瓶中加入 75 uL 10%的 APS 溶液和 15 uL TEMED 溶液，轻轻旋转混匀。用吸管将积层胶溶液缓缓地沿着一侧 隔条边缘加入到玻璃平板夹层中，直到溶液离玻璃板顶部约 3 cm 高 为止。

E) 盖 1cm 高的自备水饱和的异丁醇使胶面跟氧气隔绝（氧气会抑制胶 的凝固；此处水饱和的异丁醇可用水代替，但效果会差一些）。让分 离胶和隔离胶在室温聚合 30-45 分钟。

4. 配制 9 mL 4%浓缩胶（足够灌两块 0.75 mm×14 cm×14 cm 胶）。

A) 在一个 50 mL 的三角瓶中

B) 混匀后真空脱气 10-15 min。

C) 将 75 uL 新鲜配制的 10%的过硫酸铵溶液和 15 uL TEMED 溶液加 入到溶液中，轻轻旋转混匀。用吸管将积层胶溶液缓缓地沿着一侧隔 条边缘加入到玻璃平板夹层中，直到夹层中的溶液离玻璃板顶部约 1 cm 高为止。

D) 插入 0.75 mm 厚的塑料梳子，再补加浓缩胶溶液填满梳子间的空隙。 注意避免产生气泡。让浓缩胶在室温聚合 30-45 分钟。

5. 小心拔出塑料梳子，在上层缓冲槽中加入 1×Tricine-SDS-PAGE 阴极电 泳液(下称阴极电泳液)，并用 1×阴极电泳液冲洗加样孔。注：本产品提 供 10 升的阴极电泳液干粉，将所有干粉溶解在 600-800 mL 去离子水 中，最后定容到 1000 mL 即得 10×阴极电泳液，可以室温放置，不需 要灭菌，用时再用去离子水稀释 10 倍成 1×阴极电泳液。

6. 在电泳装置的下层缓冲液槽中加入 1×Tricine-SDS-PAGE 阳极电泳液 (下称阳极电泳液)。注：本产品提供 10 升的阳极电泳液干粉，将所有干 粉溶解在600-800 mL去离子水中，用自备的浓盐酸调pH 到8.9（25℃） 后定容到 1000 mL 即得 10×阳极电泳液，灭菌后可以 4℃长期放置。用 时再用去离子水稀释 10 倍成 1×阳极电泳液。

7. 在密封的螺盖微量离心管中，用2×Tricine-SDS-PAGE上样缓冲液按1： 1 的比例稀释蛋白样品，于 100℃煮沸 3-5 分钟。注意：如果样品是蛋 白沉淀物，则加入 50-100 uL 新配的 1×Tricine-SDS-PAGE 上样缓冲 液溶解；如果样品是蛋白稀溶液，可先浓缩蛋白质。与Tricine-SDS-PAGE 上样缓冲液混合后的样品如未经 100℃加热灭活蛋白酶，切勿放于室温。

8. 上样。如果用考马斯亮蓝染色，对于成分复杂的蛋白质样品，上样量最好 为 20 uL（含 25-50 ug 总蛋白质）；对于只有一种或几种蛋白质的样品， 上样量最好为 1-10 uL。如果用银染，上样量可减少 10-100 倍。

9. 电泳。先 30 V 恒压电泳 1 h（对 0.75mm×14cm×14cm 的胶而言）， 然后 150 V 恒压电泳 4-5 h。注：本产品的 Tricine-SDS-PAGE 上样液 使用了考马斯亮蓝 G-250 作为指示剂，其泳动速度比最小的肽还快。

10. 终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理（最好用银染染色，节约样品）。 注意：考染或银染时，基本步骤同蛋白 PAGE 胶染色，只是任何一步（尤 其是固定步骤）的处理时间都不要超过 20 分钟，否则多肽非常容易扩散 出 PAGE 胶而降低检测的灵敏度。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！