柱式白色念球菌RNA提取试剂盒（柱式白色念球菌RNAout）

柱式白色念球菌RNA提取试剂盒（柱式白色念球菌RNAout）

产品及特点 白色念珠菌（Candida albicans），是一种真菌，通常存在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病，当机体免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调，则本菌大量繁殖并改变生长形式（芽生菌丝相）侵入细胞引起疾病。因此对其进行分子生物学研究具有重要意义。但其RNA的提取不是非常容易，所以本公司专门开发了专门用于白色链珠菌总RNA快速提取的本试剂盒，其主要特点是：
1.操作更加简单快速，整个过程只需要不到十分钟（对一个样品而言）。
2.RNA纯度更高，OD260/OD280一般在2.0左右。
3.一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
4.RNA产率高，一般在 20-70 ug/mL酵母培养物(约 2.0 ×10E个细胞)。
5.得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
6.可以进行无氯仿操作，只是纯度稍微降低，但不影响使用。

7.本产品只能用于科研。

规格及成分

运输及保存 常温运输和保存，溶液A 需要放4℃长期保存，有效期一年。
自备试剂 氯仿。
使用方法 1.将 50mg左右的样品(或100 mg左右的菌落)转移到1.5 mL 塑料离心管中。如果是液体真菌培养物，则直接将1-10 mL液体真菌在1.5 mL塑料离心管中12000-15000g离心1分钟，并弃尽液体培养基（可以分多次离心）。 
2.加入0.4 mL溶液A并充分吹打混匀。如果A溶液存放时产生沉淀，请置于 65℃融化，用前充分摇晃均匀。 
3.加入0.4 mL溶液B，剧烈振荡 30 秒。 
4.65℃保温5分钟。 
5.室温12000-15000 g 离心3-5分钟，转移上清到一干净的1.5 mL塑料离心管中。
6.再加入0.1 mL溶液B和0.1mL 自备氯仿，振荡混匀30秒。
7.室温12000-15000 g离心3-5分钟，转移上清到一自备的、干净的5 mL 塑料离心管中。
8.加入相当于上清3倍体积的溶液C（约 1.2-1.5 mL）和1倍体积的溶液 D（约0.4-0.5 mL），充分混匀。 
9.将混合液（约2.5mL）分3-4次转移到离心吸附柱中。每次13000-15000 g 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。 
10.用0.5 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11.一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品OD260/280 比值不高，可以 再用 0.5 mL通用洗柱液重复此步一次。 
12.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的洗柱液会影响RNA的使用。 
13.将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 1.5 mL塑料离心管中，加入 30-100 uL RNA洗脱液。 
14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于 -80℃待用。
15.RNA 完整性的电泳检测： 如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28： 414，2000）。如果是简单检测，可以使用TAE 或SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液（BioTechniques，9:558，1990）。普通DNA上样液不含变性剂，也没经过去RNase处理，所以最好不要使用。尤其需要注意的是不要使用 TBE进行RNA电泳，因为TBE所含硼酸是研究多糖的经典方法----硼酸络合法中的关键成分，硼酸通过与RNA核糖中的羟基发生络合反应，形成 RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的 RNA具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA络合复合物迟留在加样孔中（一般会误以为是基因组DNA污染）。RNA分子内或 RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼酸与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖也会参与此反应，使硼酸对RNA电泳的影响更复杂，所以 TBE对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。 有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
16.RNA产量产率测定： 将 5-10 μL RNA溶于TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40， μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度 X 体积)和产率(RNA 产量/细 菌用量)。注意不要将 RNA 稀释在DEPC水中检测OD260和OD280， 否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%。 17. RNA 纯度测定： 无污染的总RNA的 OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230 一般在2.0-2.3之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/氯仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用本公司的DNA Erasol和PS Erasol去除。测OD时RNA不能过度稀释使 OD 读数低于仪器的有效范围。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！