糖化血清蛋白含量检测试剂盒（NBT法）可见分光光度法

糖化血清蛋白（GSP）含量检测试剂盒（NBT 法）说明书

可见分光光度法

规格：50T/48S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

标准品：临用前加入 0.8 mL 试剂二，充分溶解，配制成 10 mmol/L DMF 标准液，2-8℃保存 4 周；再取 40μL

10 mmol/L DMF 标准液和 60μL 试剂二混合配制成成 4 mmol/L 标准溶液待测。

产品说明：

血清葡萄糖与白蛋白及其它血清蛋白分子 N 末端的氨基发生非酶促糖化反应，形成高分子酮胺结构，在碱性条件下与硝基四氯唑蓝反应，生成紫红色化合物甲臜。在 530nm 波长处比色，测定其 OD 值，与 DMF 标准比较，即可求得其含量。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、恒温培养箱、低温离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

血清（浆）：收集血清（浆）到离心管内，按照血清（浆）体积（mL）∶试剂一体积（mL）= 10∶1 的比例（建议吸取 0.5 mL 血清（浆）于 EP 管中，加入 0.05 mL 试剂一），充分混匀，于 37℃保温 30 min。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 530 nm，蒸馏水调零。

2、 标准溶液：按照标准溶液体积（mL）：试剂一体积（mL）= 10∶1 的比例（建议吸取 0.5 mL 4 mmol/L 标准溶液于 EP 管中，加入 0.05 mL 试剂一），充分混匀，于 37℃保温 30 min。

3、 按下表步骤加样：

三、糖化血清蛋白含量计算

糖化血清蛋白含量（mmol/L）=C×ΔA 测定÷ΔA 标准×F= 4×ΔA 测定÷ΔA 标准×F

C：标准溶液浓度，4 mmol/L；F：稀释倍数。

注意事项：

1、显色完成后，应立即加入试剂四；建议一次性不要做太多样本，防止试剂四加入不及时导致测定结果受到影响。

2、如果测定吸光值 A＞1.0 或 ΔA＞0.8，建议稀释样本后再测定，计算公式中乘以稀释倍数；如果测定吸光值较低或接近空白 OD 值，建议增加操作表中的样本量后再进行测定（空白管、标准管、标准空白管需要增加至相同体积量）。

实验实例：

1、 取 0.5 mL 小鼠血清加入 0.05 mL 试剂一，充分混匀，于 37℃保温 30 min。标准溶液处理同上。按照测定步骤操作，测定后计算 ΔA 测定=A 测定-A 空白=0.315-0.002=0.313，ΔA 标准=A 标准-A 标准空白=0.29-0.092=0.198，按公式计算小鼠血清中糖化血清蛋白含量：

糖化血清蛋白含量（mmol/L）= C×ΔA 测定÷ΔA 标准=4×0.313÷0.198=6.323 mmol/L。

2、 取 0.5 mL 马血清加入 0.05 mL 试剂一，充分混匀，于 37℃保温 30 min。标准溶液处理同上。按照测定步骤操作，测定 ΔA 测定=A 测定-A 空白=0.098-0.002=0.096，测定 ΔA 标准=A 标准-A 标准空白=0.29-0.092=0.198，按公式计算血清中糖化血清蛋白含量：

糖化血清蛋白含量（mmol/L）= C×ΔA 测定÷ΔA 标准=4×0.096÷0.198=1.939 mmol/L。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！