ABTS自由基清除能力检测试剂盒 微量法

ABTS 自由基清除能力检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/48S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 1 mL 蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂可分装后保存，-20℃可保存四周，避免反复冻融；

2、 试剂三工作液的配制：液体置于试剂瓶内 EP 管中。临用前根据样本量按试剂三（μL）：蒸馏水（mL）=1μL:12mL 的比例配成试剂三工作液，现用现配，用多少配多少，尽量在 4h 之内用完；

3、 试剂四工作液的配制：可先将试剂四-20℃分装保存。临用前根据样本量按试剂四：试剂一（V:V）=1:9的比例配成试剂四工作液，现配现用，用不完的试剂放于-20℃可保存两周。

4、 试剂五：粉剂置于试剂瓶内玻璃瓶中，含有 5 mg 维生素 C，临用前加入 2.8 mL 提取液，充分振荡溶解；配成 10 mmol/L 维生素 C 溶液，用于阳性对照。2-8℃可保存两周。

5、 ABTS 工作液的配制：临用前根据试验所需量按试剂一：试剂二：试剂三工作液（V:V:V）=76:5:4 的比例配成 ABTS 工作液，现用现配，室温避光保存，务必在 30 分钟内使用。

产品说明：

ABTS 法可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定，是使用最广泛的间接检测方法。ABTS 经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子 ABTS 自由基，在 405 nm 或 734 nm 处有最大吸收峰。被测物质加入 ABTS 自由基溶液后，所含抗氧化成分能与 ABTS 自由基发生反应而使反应体系褪色，405 nm 的吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比。本试剂盒中，通过测定吸光度下降的程度来反映样本清除 ABTS 自由基的能力。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、恒温水浴锅、台式离心机、研钵/粉碎机、烘干箱、30~50目筛、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、植物组织样本的制备：将新鲜样本置于 60℃烘箱烘干至恒重，研钵研碎（或粉碎机粉碎），过 30~50 目筛；称取约 0.05 g 样本，加入 1 mL 提取液后置于 40℃水浴锅中浸提 30 min；10000 rpm 室温离心 10 min，取上清，置于冰上待测。

2、红酒、果汁等液体样本：吸取 100 μL 样本溶液加入 900 μL 提取液，旋涡振荡混匀，室温 10000 rpm 离心10 min，取上清，置冰上待测。

3、提取物或者药物：可用提取液配制成一定浓度，如 5 mg/mL。

注意：不同样本清除 ABTS 自由基的能力可能相差很大，为保证实验结果的准确性，样本要根据预实验结果进行适当调整（如清除率大于 90%，建议将提取的样本用提取液进行稀释；清除率小于 5%，建议加大烘干样本质量或液体样本体积进行提取）。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长至 405 nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2. 阳性对照的准备：若需要线性关系，建议将 10 mmol/L 的维生素 C 溶液用提取液配制成 1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1 mmol/L 的维生素 C 溶液待用，稀释可参考下表；若需要清除率约为 90%的阳性对照，则建议将 10 mmol/L维生素 C 溶液用提取液配制成大于 1 mmol/L 的维生素 C 溶液待用。

3. 操作表：在 96 孔板或 EP 管中分别加入下列试剂：

三、ABTS 自由基清除率的计算

1. 阳性对照的自由基清除率计算公式：

ABTS 自由基清除率 DVC% =[(A 空白-A 阳性对照)÷A 空白]×100%。

2. 样本的自由基清除率计算公式：

ABTS 自由基清除率 D% =[A 空白-(A 测定-A 对照)]÷A 空白×100%。

注意事项：

1、不同样本清除 ABTS 自由基的能力可能相差很大，如果要比较不同样本的 ABTS 自由基清除能力，建议对于同一批样本加入等量的样本，红酒、组织匀浆、果汁等液体样本加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。在比较时，将样本根据预实验结果进行适当调整，比较同样浓度（相同稀释倍数）的清除率大小。

2、样本建议当天提取当天检测。

实验实例：

1、 取 0.05 g 辣椒加入 1 mL 提取液进行匀浆研磨，离心取上清后按照测定步骤操作，计算清除率得：

D% =[A 空白-(A 测定-A 对照)]÷A 空白×100% =[1.111-(0.365-0.061)]÷1.111×100%=72.637%。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！