尿酸酶活性检测试剂盒 可见分光光度法

尿酸酶活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格: 50T/24S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前取 1 瓶加入 6 mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂 2-8℃保存 1 周。

2、 试剂三：临用前加入 12 mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂 2-8℃保存 4 周。

3、 试剂四：临用前加入 12 mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂 2-8℃保存 4 周。

4、 试剂五：粉剂置于瓶内玻璃管中。临用前加入 12 mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融。

5、 标准品：临用前加入 898 μL 蒸馏水得到 1 mmol/mL 的过氧化氢溶液，2-8℃保存 4 周。

6、 工作液 A 的配制：用于样本测定管、空白管及标准管的检测，按照试剂二 : 试剂三 : 试剂四 : 试剂五 :试剂六= 1 : 1 : 1 : 1 : 2 的比例配制，根据样本量现配现用，配后建议 2 小时内用完。

7、 工作液 B 的配制：用于样本对照管的检测，按照试剂二 : 试剂三 : 试剂四 : 试剂五 : 试剂一= 1 : 1 : 1 :1 : 2 的比例配制，根据样本量现配现用，配后建议 2 小时内用完。

产品说明：

尿酸酶，又名尿酸氧化酶，是一种参与嘌呤降解途径的氧化酶，可以将尿酸分解为尿囊酸素进而排出体外。尿酸为嘌呤代谢的终末产物，积累过多将导致通风、肾病、心血管疾病等多种疾病的发生。尿酸酶在尿酸相关疾病的临床检测以及治疗中有着重要意义。

  尿酸酶催化尿酸分解为尿囊素、CO₂和 H₂O₂，H₂O₂氧化亚铁氰化钾中的 Fe²⁺生成 Fe³⁺，Fe³⁺进一步与 4-氨基安替比林和酚反应生成红色醌类化合物，在 505 nm 处有特征吸收峰，通过测定 505 nm 处的吸光值来反映尿酸酶的活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、1 mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、超声破碎仪、研钵/匀浆器、冰、EP 管、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照组织质量（g）: 提取液体积(mL)为 1 : 5~10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入 1 mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000 rpm，4℃，离心 10 min，取上清置于冰上待测。

细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）: 提取液体积（mL）为 500~1000 : 1 的比例（建议 500 万个细菌或细胞加入 1 mL 提取液），冰浴超声波破碎细菌或细胞（功率 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，总时间 5 min）；然后 10000 rpm，4℃，离心 10 min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 505 nm，蒸馏水调零。

2、 将 1 mmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为 0.25 μmol/mL 的标准溶液备用。标准溶液的稀释：取 20μL 1mmol/mL过氧化氢标准液，加入 1980μL 蒸馏水，充分混匀，配制成 10μmol/mL 标准液，再取 50μL 1mmol/mL 过氧化氢标准液，加入 1950μL 蒸馏水，充分混匀，配制成 0.25μmol/mL 标准液使用，现用现配。（实验中每管需要150μL，为减小实验误差，故配制大体积）。

3、 操作表：(在 1.5 mL 离心管中)

三、尿酸酶活性计算

（1）按样本质量计算

酶活定义：在 pH 8.8 的条件下，每克样本每小时分解尿酸产生 1 μmol 的 H₂O₂定义为一个酶活力单位。尿酸酶酶活（U/g 质量）= ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标准）×V 样本÷（W×V 样本÷V 提取）÷T

= 0.5×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W

（2）按蛋白浓度计算

酶活定义：在 pH 8.8 的条件下，每毫克蛋白每小时分解尿酸产生 1 μmol 的 H₂O₂定义为一个酶活力单位。

尿酸酶酶活（U/mg prot）= ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标准）×V 样本÷（Cpr×V 样本）÷T

= 0.5×ΔA 测定 ÷ΔA 标准÷Cpr

（3）按照细菌或细胞数量计算

酶活定义：在 pH8.8 的条件下，每 10⁴个细菌或细胞每小时分解尿酸产生 1 μmol 的 H₂O₂定义为一个酶活力单位。

尿酸酶酶活（U/10⁴ cell）= ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标准）×V 样本÷（细菌数量(万个)×V 样本÷V 提取）÷T=0.5×ΔA 测定÷ΔA 标准÷细菌数量（万个）

C 标准：标准溶液浓度，0.25 μmol/mL；V 样本：加入的样本体积，0.15 mL；V 提取：提取液体积，1 mL；

T：酶促反应时间：0.5 h；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

注意事项：

1、 A 大于 1 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定，并在计算时乘以相应的稀释倍数。

2、 工作液 A 与工作液 B，需根据样本量现配现用，配后建议 2 小时内用完。工作液本身为淡黄色，随着时间的延长，会由淡黄色变为粉色、红色甚至酒红色，如有变色，则视为失效，需重新配置。

实验实例：

1、 取 0.1g 小鼠肝脏进行样本处理，取上清稀释 8 倍后按测定步骤操作，测定计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.652-0.218=0.434，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.614-0.017=0.597，按样本质量计算酶活得：

尿酸酶酶活（U/g 质量）= 0.5×ΔA÷ΔA 标准÷W×8（稀释倍数）=29.08 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！