吡咯啉-５-羧酸合成酶（P5CS）活性检测试剂盒 微量法

吡咯啉-５-羧酸合成酶（P5CS）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、试剂三：临用前取 1 支加入 0.833 mL 蒸馏水溶解，现配现用。-20℃分装保存；-20℃保存一周；

2、试剂四：临用前加入 3 mL 蒸馏水溶解，现配现用。-20℃分装保存；-20℃保存一周。

产品说明：

在干旱、盐渍化、重金属、紫外线等不同的胁迫条件下，均会诱导植物体内脯氨酸的积累，对植物起到保护作用。高等植物中，脯氨酸的合成有两条途径，分别以谷氨酸和鸟氨酸为前体。谷氨酸途径主要负责胁迫条件下脯氨酸的积累，而鸟氨酸途径主要在氮充足条件下起作用，与胁迫情况下脯氨酸的积累没有关系。

吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）是脯氨酸的谷氨酸合成途径中的关键酶，P5CS 是一个双功能酶，在 NADPH和 ATP 作用下，可催化谷氨酸磷酸化及谷氨酸 γ-半醛还原，通过测定 NADPH 在 340 nm 处吸光度的变化，可计算出 P5CS 的活性高低。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP 管。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织样本：按质量（g）︰提取液体积（mL）1︰5~10 比例（建议称取 0.1 g 样本，加入 1.0 mL 提取液一）加入提取液一，冰浴匀浆后加入 10 μL 提取液二，于 4℃，8000 rpm，离心 15 min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长至 340 nm，蒸馏水调零。

2、 将试剂三、试剂四置于冰上待测。

3、 操作表：（在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中操作）

三、P5CS 酶活计算

注意事项：

1、当 A1 测定高于 1.5 或者 ΔA 大于 0.5 时，建议将样本稀释后检测，并在计算公式中乘以稀释倍数。

2、尽量使用新鲜样本进行检测，操作时请置于冰上操作。

3、ΔA 空白管的数值一般不超过 0.05。

实验实例：

1、取 0.1g 三叶草进行样本处理，样本稀释 2 倍，按照测定步骤操作（微量石英比色皿检测），计算得 ΔA 测定管=A1 测定-A2 测定=1.0302-0.9842=0.046，ΔA 空白管=A1 空白-A2 空白=0.7431-0.7248=0.0183，ΔA=ΔA 测定管-ΔA空白管=0.0277，按照样本质量计算酶活得：

P5CS 酶活（U/g 质量）=324.76×ΔA÷W=179.9U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！