亮氨酸氨基肽酶（LAP）活性检测试剂盒 微量法

亮氨酸氨基肽酶（LAP）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

试剂二：临用前加入 2.5 mL 丙酮溶解。

产品说明：

LAP是一种膜结合酶，广泛存在于肝、胆、胰等组织中，参与组织蛋白和某些肽类的降解更新。各类肝病患者因肝细胞损伤，血清LAP的活性均有不同程度的升高，LAP可以作为各类肝病的一项初步检测指标，特别是肝癌鉴别诊断的指标。

LAP分解L-亮氨酸对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在405nm有最 大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算LAP活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、丙酮、匀浆器/研钵、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，然后，10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

2、细胞或细菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3、液体：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至405nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、 加样表：在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入下列试剂

三、LAP酶活计算

注意事项：

1、ΔA大于0.5时或者A值大于1.5时建议将样本上清用试剂一稀释后再进行测定。

2、空白管的ΔA变化小于0.01。

实验实例：

1. 取 0.1g 小鼠肾脏加入 1mL 试剂一进行匀浆研磨，取上清按照测定步骤操作，用微量玻璃比色皿测得计算 ΔA测定管= A2 测定-A1 测定=0.4537-0.3691=0.0846，ΔA 空白管=A2 空白-A1 空白=0.0157-0.0133=0.0024，ΔA=ΔA测定管-ΔA 空白管=0.0846-0.0024=0.0822，按样本质量计算酶活得：

LAP（U/g 质量）=675.4×ΔA÷W=675.4×0.0822÷0.1=555.1788 U/g 质量。

2. 取鸡血清直接按照测定步骤操作，用微量玻璃比色皿测得计算 ΔA 测定管= A2 测定-A1 测定=0.094-0.0798=0.0142，ΔA 空白管=A2 空白-A1 空白=0.0157-0.0133=0.0024，ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管=0.0142-0.0024=0.0118，按样本质量计算酶活得：

LAP（U/g 质量）=675.4×ΔA=675.4×0.0118=7.9697 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！