碱性木聚糖酶活性检测试剂盒 微量法

碱性木聚糖酶（BAX）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一

溶液的配制：

1、 标准品：10 mg 木糖，临用前加入 667 μL 蒸馏水配制成 100 μmol/mL 的木糖标准液。

产品说明：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，碱性木聚糖酶（BAX）一般分离自最适生长pH为9-11的微生物。

BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值增加速率，可计算BAX活力。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、发酵液：发酵液于 8000rpm，4℃，离心 15min，取上清，作为待测样本。

2、组织样本：称约 0.1g 组织，加入 1mL 缓冲液，冰上充分研磨。8000rpm，4℃，离心 15min，取上清蒸馏水稀释 10 倍待测。

3、酶干粉：称约 1mg，加 1mL 缓冲液溶解，蒸馏水稀释 10 倍待测。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、 2μmol/mL木糖标准品的制备：将标准品用蒸馏水稀释50倍即2μmol/mL的木糖标准溶液备用。

3、 样本测定（在EP管中加入下列试剂）

三、BAX 计算公式

注意事项：

吸光度变化应该控制在0.01~1.2之间，否则加大样本量或稀释样本，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

实验实例：

1、 取 0.1g 锯齿叶加入 1mL 缓冲液进行匀浆研磨，取上清用蒸馏水稀释十倍后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得 A 测定=0.584，A 对照=0.428，A 标准=0.470，A 空白=0.127，按样本质量计算酶活得：

BAX 活力（U/g 质量）=0.67×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷W2=0.67×（0.584-0.428）÷（0.470-0.127）÷0.1=3.047 U/g 质量。

2、 取酵母菌离心取上清按照测定步骤操作，用 96 孔板测得 A 测定=0.599，A 对照=0.543，A 标准=0.470，A 空白=0.127，按发酵液计算 BAX 活力得：

BAX 活力（U/mL）=0.067×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）=0.067×（0.584-0.428）÷（0.470-0.127）=0.011U/mL。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！