脂蛋白酯酶（LPL）检测试剂盒微量法 微量法

脂蛋白酯酶（LPL）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、试剂二：临用前加入 1 mL 丙酮溶解备用；

2、标准品：5 μmol/mL 对硝基苯酚标准溶液。

产品说明：

脂蛋白酯酶（Lipoproteinlipase，LPL）是甘油三酯降解的降速酶，可催化甘油三酯水解为脂肪酸和单酸甘油酯，主要在肝脏实质细胞中合成，在脂质代谢和转运中发挥重要作用。

脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕榈酸酯产生4-硝基苯酚，在400nm有特征吸收峰。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰、丙酮和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。

2、 将5μmol/mL标准液用试剂一稀释16倍至0.3125μmol/mL的标准溶液备用。

3、 操作表：在1.5mL EP管中进行下列操作：

三、LPL活性计算

注意事项：

1、 测定管加入试剂二后混变浑浊为正常现象。

2、 若A大于2，将粗酶液用试剂一稀释后再进行测定。

实验实例：

1、 取0.1g大鼠肌肉加入1mL试剂一，取上清后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA=A测定管- A对照管=0.367-0.128=0.239，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.378-0.046=0.332，按样本质量计算酶活得：

LPL（U/g 质量）= 31.25×ΔA÷ΔA标准÷W=31.25×0.239÷0.332÷0.1=224.96 U/g 质量。

2、 取兔血清直接按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA=A测定管- A对照管=0.750-0.152=0.598，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.378-0.046=0.332，按血清（浆）体积计算酶活得：

LPL（U/mL）=31.25×ΔA÷ΔA标准=31.25×0.598÷0.332=56.29 U/mL。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！