酸性蛋白酶（ACP）活性检测试剂盒 微量法

酸性蛋白酶（ACP）活性检测试剂盒说明书

微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 4 mL 试剂五，沸水浴中搅拌溶解；

2、 标准品：20μmol/mL 标准酪氨酸。

产品说明：

ACP 是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。

 酸性条件下，ACP 催化酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；钨蓝在680nm 有特征吸收峰，通过测定其吸光度增加，来计算 ACP 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

研钵/匀浆器、台式离心机、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、1.5 mL EP 管、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称约0.1g组织，加入1mL提取液，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待测。或直接称取0.1g酶制品，加入1mL提取液，置冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

2、 试剂一、试剂二和试剂三置于30℃水浴保温30min以上。

3、 标准溶液的配制：临用前将20μmol/mL标准液用蒸馏水稀释80倍至0.25μmol/mL 标准溶液使用，现用现配。

4、 样本测定（1.5mLEP管中分别加入下列试剂）

三、ACP活性计算

注意事项：

若反应较弱，（A 测定管-A 对照管）差值较小，可适当延长反应时间（20-30min），即第 一步水浴时间，最 后计算酶活时对公式进行修改。

实验实例：

1、 取 0.1g 小鼠肝脏加入 1mL 提取液冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上，之后按照测定步骤操作，使用 96 孔板测得计算 A 测定管=0.303，A 对照管=0.271，A 标准管=0.253，A 空白管=0.044，按样本质量计算酶活得：

ACP 活性（U/g 质量）=0.125×（A 测定管-A 对照管）÷（A 标准管-A 空白管）÷W=0.191 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！