游离胆固醇(FC)含量检测试剂盒 微量法

游离胆固醇（FC）含量检测试剂盒说明书

微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 提取液：自备异丙醇；

2、 标准品：10 mg 胆固醇，临用前加入 517 μL 异丙醇，振荡溶解，即为 50 μmol/mL 的胆固醇标准溶液，再将其用异丙醇稀释为 2 μmol/mL 的标准品，待测。

产品说明：

FC是构成细胞膜的主要成分，也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料。FC浓度可作为脂代谢的指标。 测定原理：FC氧化酶催化FC生成4-胆甾烯酮和H2O2，过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物，在500nm有吸收峰，其颜色深浅与FC含量成正比。

技术指标：

最 低检出限：0.119 μmol/mL

线性范围：0.125-6 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、异丙醇、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声2秒，间隔3秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清（浆）样本：直接测定。

二、测定步骤

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。

2. 按需取出一定量的工作液，并在37℃水浴中预热30min，其余的4℃保存。

3. 样本测定：1.5mL离心管/96孔板中加入下列试剂：

三、计算公式

注意事项：

如果样本吸光值大于 1.2，建议将样本用提取液稀释后进行测定。

实验实例：

1、 取 0.1g 小鼠肝脏加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，使用 96 孔板测得 A 空白管=0.046、A 标准管=0.354、A 测定管=0.127，按样本质量计算含量得：

FC 含量（μmol/g 质量）=2×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷W =5.320 μmol/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！