总果胶含量检测试剂盒微量法 微量法

总果胶含量检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：自备浓硫酸。

2、 标准品：10 mg 半乳糖醛酸，临用前加入 0.943 mL 提取液二，配成 50 μmol/mL 的标准液。

产品说明：

果胶是植物细胞壁主要组成成分之一，分为水溶性果胶和不溶性果胶（原果胶或碱溶性果胶）。果胶是一种天然高分子化合物，具有良好的胶凝化和乳化稳定作用，已广泛用于食品、医药、日化及纺织行业。原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶，与原有的可溶性果胶进一步转化为半乳糖醛酸，产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物，在530nm处有特征吸收峰。

技术指标：

最 低检出限：0.096 μmol/mL

线性范围：0.25-4 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、浓硫酸、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

将组织样本捣碎，按照样本质量(g)和提取液一体积(mL)为 1: 20 的比列（建议取约 0.05g 样本，加入 1mL 提取液一），置于 90℃恒温水浴锅中浸提 30min，取出冷却后于 5000g、25℃离心 10min，去掉上清，沉淀中再加入 1mL提取液一重复操作一次，离心后去上清，沉淀中加入 1mL 提取液二，置于 90℃恒温水浴锅中水解 1h，取出冷却后于 8000g、25℃离心 15min，取上清液待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm，蒸馏水调零。

2. 标准品的制备：将50μmol/mL标准液用提取液二稀释3、2.5、2、1.5、1、0.5μmol/mL的标准溶液备用。

3. 操作表：

三、总果胶含量的计算

1. 标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μmol/mL）。

2. 总果胶含量的计算：

总果胶含量(μmol/g 质量)=x×V提取液二÷W=x÷W

V提取液二：加入提取液二的体积，1mL；W：样本质量，g。

注意事项：

1．浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热、冷却后再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。

2．如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

实验实例：

1、 取 0.05g 苹果果肉进行样本处理，取上清液 5 倍稀释后按照测定步骤操作，使用 96 孔板测得计算 ΔA 测定管=A测定管-A 对照管=0.25-0.074=0.176，依据标准曲线 y=0.5149x-0.1393，计算 x=0.612，按样本质量计算：

总果胶含量(μmol/g 质量)=x×5（稀释倍数）÷W=61.2 μmol /g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！