植物总酚(TP)含量检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 提取液:自备 60%乙醇,常温保存。
2、 标准品:5mg 没食子酸。临用前加入 1mL 蒸馏水,50℃加热溶解,配制成 5mg/mL 的标准溶液,2-8℃保存两周。
产品说明:
植物酚类物质具有清除自由基,抗氧化抗衰老的作用,具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。
在碱性条件下,酚类物质将钨钼酸还原,产生蓝色化合物,在760nm处有特征吸收峰,测760nm处的吸光值,即可得样本总酚含量。
技术指标:
最 低检出限:0.0015 mg/mL
线性范围:0.0024-0.3125 mg/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、烘箱、粉碎仪/研钵、30-50目筛、超声清洗仪、60%乙醇、台式离心机、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
将样本烘干至恒重,粉碎,过 30-50 目筛之后,称取约 0.1g,加入 2.5mL 提取液,用超声提取法进行提取,
超声功率 300W,温度 60℃,提取 30min。12000rpm,25℃,离心 10min,取上清,用提取液定容至 2.5mL,待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至760nm,分光光度计蒸馏水调零。
2. 标准液的稀释:将5mg/mL没食子酸标准溶液用蒸馏水稀释至0.1562、0.0781、0.0391、0.0195、0.0098、0.0049mg/mL,待测。
3. 标准液稀释可参考下表:
备注:实验中每个标准管需 10μL 标准溶液。
4. 操作表
三、总酚含量计算
1. 标准曲线绘制:根据标准管的浓度(y,mg/mL)和吸光度ΔA标准(x,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(x,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(y,mg/mL)。
2. 植物总酚含量计算:
(1)按样本质量计算:总酚含量(mg/g 质量)=y×V提取÷W=2.5y÷W
(2)按样本蛋白浓度计算:总酚含量(mg/mg prot)=y×V提取÷(V提取×Cpr)=y ÷Cpr
V提取:加入提取液体积,2.5mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
注意事项:
1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。
2. 试剂一对皮肤有一定的刺激性,请操作时做好防护措施。
实验实例:
1、 取 0.1g 处理的紫花加入 2.5mL 提取液,进行样本处理后按照测定步骤操作,使用 96 孔板测得计算 ΔA 测定=A测定管-A 对照管=0.506-0.041=0.465,带入标曲 y=3.083x+0.01,得出 y=0.1476,按样本质量计算含量得:
总酚含量(mg/g 质量)=2.5 y÷W=2.5×0.1476÷0.1=3.69 mg/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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企业名称
上海博尔森生物科技有限公司
企业信息已认证
企业类型
信用代码
91310117MA1J4K3L3L
成立日期
2020-09-02
注册资本
100
经营范围
一般项目:从事生物科技、医药科技领域內的技术开发、技术咨询、技术服务;仪器仪表、实验室设备及耗材、玻璃制品、电子产品、第一类医疗器械、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品)销售;货物或技术进出口(国家禁止或涉及行政审批的货物和技术进出口除外)
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公司地址
松江区石湖荡镇石湖新路95号
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