禽流感血凝HA实验（微量法）

禽流感血凝HA实验（微量法）

  流感病毒颗粒表面的血凝素蛋白,具有识别红细胞表面受体并使红细胞集的特性。血凝和血凝抑制试验适用于血凝紊亚型的诊断和抗体效价测定。

实验仪器与耗材

96孔V型底孔板1块 ICF-PS-96V-S

24道多功能移液工作站（十二板位）FDT-M24-12-300

pH7.2、0.01 mol/L PBS溶液

禽流感病毒血凝素分型标准抗原、标准阳性血清、  阴性血清

阿氏液

1%鸡红细胞悬液

200μl吸头一盒 PE-200A-1-TSF

4道储液槽60ml 1个 RES-60-4

废弃盒1个

实验步骤

第一步：

用24道移液工作站在96孔V型微量反应板中,每孔加0.025mLPBS溶液。

第二步：

第1孔加0.025mL抗原或病毒液,反复吹吸3次~5次混匀。

第三步：

从第1孔吸取0.025ml抗原或病毒液加人第2孔,混匀后吸取0.025ml加人第3孔,进行2倍系列稀释至第11孔,从第11孔吸取0.025mL弃去。第12孔为PBS对照孔。

第四步：

每孔加0.025 mI PBS。

第五步：每孔加人0.025 mL1%(体积分数)鸡红细胞悬液。（下图为模拟图片）

结果判定：轻扣反应板混合反应物,室温(约20℃)静置40min,环境温度过高时可在4℃条件下静置60min,当对照孔的红细胞呈显著纽扣状时判定结果。判定时,将反应板倾斜60℃,观察红细胞有无泪珠状流淌,完全无泪珠样流淌(100%凝集)的最高稀释倍数判为血凝效价。