冠突曲霉的储存条件与培养方法及注意事项有哪些？

                  冠突曲霉的储存条件与培养方法及注意事项有哪些？

冠突曲霉是Aspergillus属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究，具体用途为六堡茶发酵试验用，产生抗氧化活性物质。

一、菌种简介

平台编号：Bio-62596

规格：冻干物

拉丁属名：Aspergillus Cristatus

中文名称：冠突曲霉

拉丁名称：Aspergillus cristatus

来源历史：←安徽农业大学茶与食品科技学院

收藏时间：2014-08-11

原始编号：AHA-UG418

原产国：中国

资源归类编码：15151913102

模式菌株：非模式菌株

主要用途：研究；生产

具体用途：研究表明，通过该微生物的发酵使得茶汤的澄清度，亮度得到较高提升，并产生了特殊的菌花香气，有研究表明该菌发酵能够产生特异的酵素成分，如茯茶素。

生物危害程度：四类

培养基名称：马铃薯、葡萄糖琼脂培养基(PDA)

培养基成分：马铃薯提取液 1.0L，葡萄糖 20.0g，琼脂 15.0g，pH自然。[注] 马铃薯提取液：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1.0L煮沸30min，滤去马铃薯块，将滤液补足至1.0L。

培养温度：28℃

需氧类型：好氧

分离基物：茯砖茶

采集地：陕西咸阳市

保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享

用途：研究；生产；研究表明，通过该微生物的发酵使得茶汤的澄清度，亮度得到较高提升，并产生了特殊的菌花香气，有研究表明该菌发酵能够产生特异的酵素成分，如茯茶素。

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、储存条件

冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。

三、培养条件

1、培养基编号：CM0077

2、培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然 pH。

3、需氧类型：好氧

4、培养温度：28℃

四、培养方法

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在上延续使用半年左右。

6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。

五、注意事项

1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。

2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。

3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。

4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。

5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。

六、冻干管打管说明书

1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。

2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，并取 100μL 转接到固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。

3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。

4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。

5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。

6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。

7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。

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