紫红链霉菌的培养方法与实验内容及使用范围！

                   紫红链霉菌的培养方法与实验内容及使用范围！

紫红链霉菌，孢子丝3—8圈螺旋形，孢子呈球形、卵圆形，表面光滑。气丝薄，粉状，白色变为烬灰带微蓝色彩。主要用于产生次甲霉素和原放线紫红素。

一、菌种简介

平台编号：Bio-00347

提供形式：冻干物

拉丁属名：Streptomyces Violaceoruber

中文译名：紫红链霉菌

拉丁学名：Streptomyces violaceoruber

原始编号：LMG 20256

菌株来源：←中国科学院微生物研究所←LMG

保藏人：刘志恒

直接来源国家：比利时

保藏时间：5/1/2002

其他保藏编号：=ATCC 14980 =BCRC 11489 =CBS 569.68 =DSM 40049 =ISP 5049 =JCM 4423 =NBRC 12826 =NRRL B-12594

生物危害：四类

模式菌株：模式菌株

菌株用途：模式菌株；Produces methylenomycin and protoactinorhodin

培养温度：28℃

培养基：0038    

用途：模式菌株；产生次甲霉素和原放线紫红素

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、菌株特性

蔗糖硝酸盐琼脂：气丝薄，粉状，白色变为烬灰带微蓝色彩。基丝好，无色变红色，然后蓝色至暗蓝色。可溶色素蓝色至暗蓝色。色素随pH变化，遇酸变红色，遇碱变蓝色。葡糖天冬素琼脂：基丝贫乏，红色素不易弥散。甘油天冬素琼脂：基丝好，紫色至深蓝色。可溶色素深蓝色。甘油天冬素琼脂(ISP)、无机盐淀粉琼脂(ISP)、酵母精麦芽精琼脂(ISP)、燕麦粉琼脂(ISP)：气丝灰色。基丝反面蓝色或紫色：加0.05 NNaOH，由紫色或蓝紫色变蓝色；加 0.05 NHCl，由紫色变红紫色或红色。可溶色素蓝色或紫色，对酸碱反应与基丝色同。营养琼脂：基丝白色变为红色带白色边缘。无可溶褐色素。马铃薯块：气丝白色。基丝地衣状，微褐色，逐渐染为红色和蓝色。明胶液化缓慢。牛奶凝固有限，胨化快。淀粉水解快。纤维素上生长好。硝酸盐还原强。不产生类黑色素。利用 L-阿拉伯糖、L-木糖、D-果糖、L-鼠李鼠、棉子糖、甘露醇；大部分菌株不利用或很少利用蔗糖、菊糖。ISP：利用D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-果糖、L-鼠李糖、肌醇

三、培养方法

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在上延续使用半年左右。

6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。

四、实验内容

1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

五、使用范围

(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。

(2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。

(3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。

六、保存方法

1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。

2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。

3、悬液保存法：

①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。

5、常用的冷冻保存法：

①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。

②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。

③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。

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