人诱导多能干细胞（IPSC）培养体系常见问题及解答！

                 人诱导多能干细胞（IPSC）培养体系常见问题及解答！

人诱导多能干细胞（iPSC）培养体系是一个为体外培养无滋养层放入人诱导多能干细胞（iPSC）完全培养基方案。本体系是一个无菌的液体混合系统，其化学成分明确，无动物蛋白成分。本体系是一种按固定配方配制的液态培养体系，可以为体外培养的人iPSC提供一个确定适宜的平衡营养环境，并且可以选择性的促进未分化细胞的生长，而分化的细胞的则无法再培养体系中生长；从而选择性的只扩增未分化的人iPSC。

产品信息

平台编号：Bio-121972

规格：500mL

细胞名称：人诱导多能干细胞（IPSC）培养体系

ips细胞基础培养基

规格：500mL储存条件：基础培养基2~8℃，

ips细胞培养添加剂

规格：20ml储存条件：添加剂-80~-20℃；混匀后2~8℃，2-3周内使用完毕。

用途：Ips细胞专用培养基

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

产品简介

iPS细胞培养基是一种适用于无饲养层培养、化学成分明确、并且不含动物源蛋白的人多潜能干细胞（hESC/hiPSC）完全培养基。iPS细胞培养基是在James Thomson实验室开发的Essential 8培养基的基础上，由本公司改良研发出的最新型多潜能干细胞完全培养基。hESC/hiPSC在iPS细胞培养基中可以快速增殖，而分化的细胞则无法在该培养基中生长，从而选择性扩增并获得高纯度多潜能干细胞。

试剂准备

iPS细胞完全培养基：将iPS细胞添加剂加入iPS细胞基础培养基中形成iPS细胞完全培养基（推荐每2mL添加剂与50mL基础培养基混合）。

iPS细胞完全培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。

疑难解答

1、是否还需要往iPS细胞完全培养基中补充或添加成分？

不需要。iPS细胞培养基中各个成分的质量和浓度都经过了最优化实验，完全支持人ESC/iPSC的长期培养，您无需再自行添加。

2、培养基中有沉淀状物质是否是质量问题？

添加剂在解冻过程中，若有少量沉淀析出，属于正常现象，不影响使用，请充分混匀后与基础培养基混合。但添加剂不能在37℃解冻，否则会析出大量沉淀，影响培养基的效价。如果培养基中出现大量沉淀，请不要使用。

3、是否能在37℃反复水浴iPS细胞完全培养基？

不能。频繁地在4℃和37℃之间转换会导致iPS细胞完全培养基中含有的因子失活，iPS细胞完全培养基在使用前平衡至室温即可。

4、iPS细胞在传代后不贴壁怎么解决？

造成iPS传代后不贴壁的最可能的原因：

①细胞消化时间不合适；②消化后吹打次数不合适，使得完成传代后细胞集落过大或过小。

5、iPS分化怎么处理？

①细胞在刚复苏或传代时，小的细胞团不呈现标准的克隆形态，培养几天或传代后可恢复。

②如果iPS分化的表现为干细胞克隆形态良好，克隆周边出现散在的分化细胞，可通过高比例传代（≥1:10），使得分化细胞的密度减少，低密度的分化细胞可被iPS培养体系筛选去除，如未完全去除，可用细胞刮或巴斯德管刮除。

③如果iPS分化的表现为克隆内部松散，边缘不平滑，在分化比例小或分化不严重的情况下，可通过连续传代2~3次恢复，如果分化严重，建议弃除。

6、细胞复苏率低是什么原因？

细胞复苏需使用iPS细胞复苏培养基，可大大提高细胞的复苏效率。复苏过程中，转移细胞、吹打混匀和重悬细胞时，吹打力度要轻柔，并尽量减少吹打次数，细胞接种后，即刻在显微镜下观察细胞团块的大小，4~10个细胞的团块为最佳。如果吹打力度过大或次数过多，导致细胞分散成单细胞，细胞复苏率将偏低。

细胞复苏

1、首先开启复苏添加剂小瓶上的铝盖，并用酒精棉擦拭其表面，使用注射器吸取5mL复苏基础培养基加入到瓶中，颠倒混匀。

2、将复苏添加剂和复苏基础液按照0.5mL：10mL的比例混匀，配置后的复苏CM培养基保存4℃（可保存2周，可根据试剂用量将 添加剂分装保存于-80℃，避免反复冻融）。

3、37℃水浴中，迅速解冻细胞，用酒精棉擦拭，转移至无菌操作台中。

4、将细胞悬浮液转移至含有5mL复苏CM培养基的15mL离心管中 200g离心5min。

5、弃上清，加入适量复苏CM培养基，轻柔重悬细胞，接种到包被 好的培养瓶中。

6、水平十字摇匀，室温放置15min.显微镜下观察大部分细胞贴壁后 ，放入5%CO 的37℃培养箱中。

7、培养24h后，弃掉复苏CM培养基，加入新鲜的干细胞CM培养基

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