WISTAR大鼠骨髓间充质干细胞完全培养基的应用！

                   WISTAR大鼠骨髓间充质干细胞完全培养基的应用！

一、背景

WISTAR大鼠骨髓间充质干细胞完全培养基特别添加了能有效改善细胞生长状态的营养物质和特别甄选的优质胎牛血清，适合Wistar大鼠骨髓间质干细胞的体外培养。

培养基分装成小瓶(100～200 mL)以便使用，翻帽塞塞紧瓶口。按细胞生长需求，制备相应的生长培养基。一般的细胞生长培养基为培养基+10%胎牛血清，最后按1％体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U／mL和100 U／mL。

骨髓原始间充质干细胞是骨髓基质干细胞，是人们在哺乳动物的骨髓基质中发现的一种具有分化形成骨、软骨、脂肪、神经及成肌细胞的多种分化潜能的细胞亚群。它们对骨髓中的造血干细胞（HSC）不仅有机械支持作用，还能分泌多种生长因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）来支持造血。

骨髓间充质细胞原代培养过程中，约24小时即可出现贴壁生长，细胞呈圆形、梭形、三角形生长缓慢。换液后细胞增殖明显，出现以梭形为主的多种形态，10-14天70%-80%可融合达到传代标准。传代细胞形态单一，呈梭形或扁平型，增殖至细胞融合时呈漩涡状和放射状排列。

二、应用

用于异补骨脂素对小鼠骨髓脂代谢影响及其机制的相关研究：

研究发现骨质疏松的骨质中骨量的降低和骨髓腔中脂肪组织的增加具有相关性。经典理论认为成骨细胞和骨髓间质中的脂肪细胞来源于同一种前体细胞,即骨髓间充质干细胞。通过对去卵巢的骨质疏松模型小鼠补充异补骨脂素来探讨异补骨脂素在体内对骨髓腔中脂肪细胞分化成熟能力的影响。

此外,通过体外实验来评价异补骨脂素在成骨诱导和成脂诱导条件下对C57/BL6小鼠的骨髓间充质干细胞分别向成骨细胞和脂肪细胞成熟分化的能力的影响,并且明确了在以上两种过程中细胞学或者是分子生物学的机制。以上的发现可能对临床上治疗骨代谢紊乱提供一条新的思路。

细胞培养小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）分离至4周大的C57/BL6雌鼠,提取骨髓间充质干细胞（BMSCs）。小鼠用CO2处死,股骨和胫骨被分离,骨髓腔用眼科剪剪开后用1ML注射器吸取a-MEM（a-MEM;Gibco-BRL,GrandIsland,NY）培养基冲洗骨髓,冲洗至骨头发白即可。

分离出的骨髓间充质干细胞（BMSCs）用10%的胎牛血清培养,并在完全培养基中加入青／链霉素双抗（100U/ml of penicillin-streptomycin;Invitrogen,Carlsbad,CA）,细胞培养基3天更换1次。

骨髓间充质干细胞（BMSCs）种于96孔板和6孔板上进行试验,种植细胞的密度分别为1×104和1×106cells/well。细胞置于5%的C02细胞培养箱中37℃C恒温培养。

成熟成骨细胞诱导方案为骨髓间充质干细胞（BMSCs）在6孔的细胞培养板中生长约90%融合时加入成骨细胞诱导培养基（a-MEM细胞培养基含量为85%,胎牛血清含量为15%,青/链霉素双抗比例为1%,100μmol/L的地塞米松,50μg/ml的维生素C磷酸酯,10mM的β-甘油磷酸钠）,成骨培养基每3天更换1次。

成熟脂肪细胞诱导方案为骨髓间充质干细胞（BMSCs）在培养皿中长满并种于6孔板中。培养至细胞约90%融合以后,骨髓间充质干细胞（BMSCs）用成熟脂肪细胞诱导液开始诱导。

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