猪鼻支原体的培养与治疗方法及注意事项！

              猪鼻支原体的培养与治疗方法及注意事项！

猪鼻支原体是Mycoplasma属的微生物，原产地为英国。英国中央兽医实验室，NCTC10130，BTS—7。猪呼吸道。模式株。分离株血清定型。Am．J．Vet．Res．16：540—544，1955。培养基21,37℃。主要用途为研究，教学，检验，具体用途为分离株血清定型。

一、菌种简介

中文名称：猪鼻支原体

拉丁属名：Hyorhinis

规格：冻干粉

特征特性：英国中央兽医实验室，NCTC10130，BTS—7。猪呼吸道。模式株。分离株血清定型。Am．J．Vet．Res．16：540—544，1955。培养基21,37℃。

属名 种名加词：hyorhinis

其他藏中心编号：无

模式菌株：模式菌株

来源历史：←英国中央兽医实验室

主要用途：研究，教学，检验

收藏时间：1995-4-10

生物危害程度：三类

原始编号：NCTC 10130，BTS-7

培养基编号：188

具体用途：分离株血清定型

寄主名称：猪

致病对象：动物

保存方法：真空冷冻干燥法

传播途径：水平传播

实物状态：有实物

分离基物：猪呼吸道

共享方式：公益性共享，合作研究共享

采集地：英国

提供形式：冻干物

用途：分离株血清定型

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用

二、菌株特点 

1、该菌为需氧芽孢杆菌，细菌繁殖体G兰氏染色阴性呈紫色，细菌芽胞孔雀绿着色。其细菌繁殖体对培养基要求低，在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨琼脂上生长良好，表面粗糙呈米黄色。

2、适生长繁殖湿度为56－65℃，培养24h即可形成菌落，37℃下24h看不到菌落。

3、本生物指示剂载体为高级滤纸片，染菌量为5×105－5×106cfu/片或1×106cfu/片，封装在小纸袋内，热死亡时间为121℃，3.9 min阳性，19 min阴性；D10值1.3－1.9 min，符合美国药典第十一版规定标准。

4、该菌无毒，热抗稳定，在冰箱内4℃下保存一年抗力无明显下降，在常温（20℃左右）可保存1个月。

三、培养条件

1、营养肉汁琼脂：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.0。[注]培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。pH7.0。121℃，15min。

2、需氧类型：好氧

3、培养温度：55℃

四、注意事项

1、菌种常规培养时间：细菌1-2天，酵母3天，霉菌5-7天，大型真菌7-10天。

2、试管斜面种请尽快转接，不建议长期存放。

3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我司不负责任。

4、使用者应保证菌种的安全储存和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。

五、保藏方法

1、传代培养保藏法

又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。

2、液体石蜡覆盖保藏法

是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。

3、载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4、寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5、冷冻保藏法

可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6、冷冻干燥保藏法

先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。

六、猪鼻支原体感染的诊治 

猪鼻支原体是猪呼吸道内的正常菌群，但当有应激反应或病原体入侵时会诱发疾病，通常导致多发性浆膜炎、结膜炎、咽鼓管炎以及中耳炎等病症，该病通过临床症状和病变能进行初步诊断。

1、流行病学

猪鼻支原体是猪生产中常见的病原体，母猪或年龄较大的猪均可发生感染，母猪和断奶仔猪的鼻腔分泌物中能够分离获得该病原。它被认为是仔猪上呼吸道内的正常菌群，该病原在暴露后能迅速通过呼吸道传播，且通常可从肺脏和咽鼓管分离获得。大多数感染猪不出现明显的临床疾病，患病猪会产生肺炎、关节炎、多发性浆膜炎、结膜炎、咽鼓管炎以及中耳炎等临床疾病。发生全身性感染时，8 周龄以下的猪多发生浆膜炎和关节炎，3~6 月龄的猪发生关节炎 。

2、致病机理

猪鼻支原体能够黏附至猪上呼吸道和下呼吸道的纤毛上皮细胞上，肺炎的发生与呼吸道内存在的一些猪鼻支原体菌株有关。此外，猪鼻支原体感染可导致中耳炎的发生。咽鼓管内存在的病原菌由于黏附至上皮细胞的纤毛上可能会对黏膜纤毛器造成损伤，从而促使多杀性巴氏杆菌和化脓隐秘杆菌上行性感染的发生。呼吸道其他病原体或应激反应能够增加该病的发病率。

3、临床症状

猪鼻支原体感染产生的多浆膜炎通常发生于3~10 周龄猪，但是偶尔也可发生于年龄更大的猪。典型的疾病症状出现在暴露后的第 3~10 天。感染猪表现为被毛粗乱、轻度发热、精神沉郁、食欲下降、不愿活动、呼吸困难、腹部触痛、跛行及关节肿胀。在急性临床症状出现后 10~14 d 开始消退，这取决于临床疾病的严重程度，有些猪持续衰弱或发生急性死亡。在发生关节炎的情况下，跛行和关节肿胀将持续2~3 个月，但是很多猪会维持跛行长达 6 个月 。

4、治疗

猪鼻支原体对多种抗生素较为敏感，然而由于在自然感染状态下大多数病变为慢性，而且微生物的清除也很少会减少粘连和炎症的发生，因此对临床感染动物的治疗通常不易获得成功。使用泰乐菌素和林可霉素进行治疗可能会产生一定疗效。