葡萄糖半固体培养基的使用方法与应用！

               葡萄糖半固体培养基的使用方法与应用！

一、背景

葡萄糖半固体培养基可以用于志贺氏菌的复合生化试验（GB标准）。原理：蛋白胨、牛肉浸粉提供氮源、碳源；氯化钠维持均衡的渗透压；溴甲酚紫是指示剂，产酸时培养基由紫色变为黄色；葡萄糖为可发酵糖类；琼脂是培养基的凝固剂。

培养基配方（g/L）：蛋白胨：10.0；牛肉粉：3.0；氯化钠：5.0；溴甲酚紫：0.016；葡萄糖：10.0；琼脂：3.0；PH值7.4±0.1；25℃培养。

二、使用方法

1、称取本品31.0g，加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中，分装试管，121℃高压灭菌15分钟，备用。

2、制备好的试管保存于2-8℃，应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处，室温保存。

3、取新鲜质控菌株斜面，用接种针挑取菌苔穿刺接种于试管中，36±1℃培养18-24h后，观察结果。

志贺氏菌属（Shigella Castellani）是一类革兰氏阴性短小杆菌，是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，主要流行于发展中国家，通称痢疾杆菌，耐寒，能在普通琼脂培养基上经过24小时生长，形成直径达2mm大小、半透明的光滑型菌落。无芽胞，无荚膜，无鞭毛，多数有菌毛。是人和灵长类动物的肠道致病菌，引起细菌性痢疾。

三、应用

用于硫酸盐还原菌和无色硫细菌的分离纯化及鉴定：

研究对污水处理厂厌氧池、曝气池、巴盟铜矿等废水样品进行脱硫菌的分离纯化,共得到7株脱硫菌。分别对7株脱硫菌做了形态学、生理生化及分子生物学鉴定,并考察了环境因素对其生长的影响,从而得出最适生活环境。

结果：

1、采用平皿夹层厌氧法﹑焦性没食子酸法﹑Hungat滚管三种方法对污水处理厂厌氧池和巴盟铜矿的水样进行筛选,通过液体富集与固体纯化相结合的方法对菌种进行分离纯化,得到6株分离菌,分别命名为SRB-1﹑SRB-2﹑SRB-3﹑SRB-4﹑SRB-5和SRB-6。

2、6株分离菌的个体形态特征为杆状﹑单个排列﹑革兰氏阴性﹑无芽孢和荚膜;液体培养基生成FeS沉淀并产生H2S,具有硫酸盐还原菌的典型分类特征;在不含Fe2+的固体培养基中菌落为白色,而在含Fe2+的固体培养基中,菌落均为黑色,菌落直径比不含Fe2+的大;V-P试验﹑甲基红试验﹑吲哚试验呈阴性;都能利用葡萄糖、蔗糖、乳糖并产气;都具有过氧化氢酶活性。

3、6株SRB属于中温菌,其最适生长温度30～35℃;最适pH值为7.0～8.0;耐受盐浓度为7.5%。6株SRB在硫酸盐异化作用过程中能以乳酸钠﹑葡萄糖和乙酸钠等有机物作电子供体,以硫酸盐﹑亚硫酸盐和硫代硫酸盐作为电子受体。

4、采用好氧培养方法从污水厂的曝气池水样中分离筛选了1株无色硫细菌,命名为CSB-1。菌落为白色圆形,表面光滑湿润,中心凸起;延长培养时菌落变为黄色,菌落中心褐色。菌落表面有硫沉淀生成而变干;该菌株革兰氏染色呈阴性;短杆状;无芽孢﹑有荚膜;CSB-1属于中温菌,最适生长温度为30℃;最适pH值为7.0;无氧条件下无法生存。

5、通过16srDNA序列分析,构建系统发育进化树,结合形态特征、生理生化特征研究,认为SRB-2﹑SRB-3和SRB-4属于柠檬酸细菌属（Citrobacter）,SRB-1和SRB-6属于志贺氏菌属（Shigella）,SRB-5属于梭菌属（Clostridium）,CSB-1属于硫杆属（Thiobacillus）。

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