人胰腺癌相关成纤维细胞的培养步骤与注意事项！

        人胰腺癌相关成纤维细胞的培养步骤与注意事项！

一、细胞简介

平台编号：bio-108890

规格：5*10e5

拉丁属名：人胰腺癌相关成纤维细胞（永生化）

细胞名称：人胰腺癌相关成纤维细胞（永生化）

组织来源：胰腺癌相关成纤维

细胞污染：HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。

培养条件：Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%。Temperature: 37℃

细胞冻存：Freeze medium: FBS/NBS, 92%;DMSO, 8%（for reference）Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用

二、细胞详述

癌组织由实质和间质两部分构成，癌细胞构成癌实质，是癌的主要成分，具有组织来源特异性，癌间质一般由结缔组织和血管组成，起支持和营养癌实质的作用，不具有特异性。

当实体瘤超过1-2mm时，需要通过新生的血管和活化的癌相关成纤维细胞来获取癌细胞生长和增殖所必须的营养物质。其中，癌相关成纤维细胞可通过分泌多种细胞因子和生长因子来发挥促进癌血管生成的作用。

上皮间质转化（EMT）是一种胚胎发育期的表型转化，在肿瘤转移过程中也能观察到相似的EMT过程。而由上皮和间质相互作用所形成的肿瘤-宿主界面微环境的平衡状态直接决定肿瘤的发生发展。多种因素可影响该界面，其中癌相关成纤维细胞是数量最丰富的基质细胞，在调节肿瘤细胞EMT过程中发挥重要作用。它通过细胞与细胞间相互接触及分泌各种细胞因子、蛋白酶类等，促进上皮细胞及其细胞恶性转化，并对界面各组分产生重要的调控作用。

该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。

三、细胞特性

1）细胞来源于人手术胰腺癌组织。

2）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

3）细胞生长方式：长梭形，贴壁培养。

四、产品的运输和保存

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1) 1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

2) T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

五、产品使用

1) 本产品仅能用于科研

2) 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核

3) 本产品未通过用于活体诊断的审核

六、细胞的培养步骤

1、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

（1）弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

（2）加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

（3）按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

（4）将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

2、细胞复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例；

1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 

2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

七、注意事项

1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。

4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。