小鼠肠巨噬细胞试剂盒的用途！

                    小鼠肠巨噬细胞试剂盒的用途！

一、背景

小鼠肠巨噬细胞试剂盒适用于分离培养小鼠肠巨噬细胞。小鼠肠巨噬细胞试剂盒提供了小鼠肠组织分离条件，分离单个细胞的效率高。此外，本体系还能保证所分离的细胞在培养基中具有很高的活性。利用的成纤维抑制体系，可以最大程度地降低所培养的巨噬原代细胞中成纤维细胞的含量。小鼠肠巨噬细胞培养试剂盒适合于培养小鼠的肠巨噬细胞。本试剂盒包含：（1）OptiTDSTM小鼠肠巨噬细胞组织解离液（2）小鼠肠巨噬细胞组织处理缓冲液（3）FibrOutTM小鼠肠巨噬细胞成纤维抑制剂（4）小鼠肠巨噬组织洗液（5）小鼠肠巨噬细胞生长因子及血清（6）小鼠肠巨噬细胞基础培养基（7）小鼠肠巨噬组织预备液（8）小鼠肠巨噬细胞培养试剂盒使用说明书。

肠指的是从胃幽门至肛门的消化管。肠是消化管中最长的一段，也是功能最重要的一段。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段。其中，肠巨噬细胞及肠上皮细胞是肠道屏障的重要组成部分，它们功能的稳定对维持肠道屏障功能具有重要作用。

肠道屏障受损时，各自的生理功能也会出现相应的改变。小鼠肠巨噬细胞可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。肠道黏膜是机体抵御肠道病原体感染的第一道防线。小肠固有层是肠道免疫系统主要的效应位点,其中包含大量的巨噬细胞、CD4+T细胞和树突状细胞等,在早期抵抗肠道病原菌过程中起着关键作用。

其中巨噬细胞通过产生活性氧中间体和活性氮中间体等物质,在清除胞内寄生菌的过程中发挥关键的杀菌作用。

二、用途

小鼠肠巨噬细胞试剂盒可用于L.casei胞外多糖对BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞及小肠巨噬细胞免疫调节作用研究：

乳酸菌胞外多糖(lactic acid bacteria exopolysaccharides,LAB EPS)是乳酸菌发酵产生于细胞外的一种水溶性多糖,普遍存在于酸乳和干酪等发酵食品中,具有丰富的生物活性,如抗肿瘤活性、免疫调节活性及调节胃肠道功能活性等等,且无毒副作用,因此受到了人们广泛的研究与应用。目前关于乳酸菌胞外多糖的物理化学性质,生理功能等方面的研究比较多,但是在分子和细胞水平的深入研究比较少,比如对腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage)、小肠巨噬细胞(small intestine macrophage)的免疫调节作用,还不清楚。因为巨噬细胞在炎症反应中发挥重要作用,其产生的多种细胞因子和炎症介质是炎症反应发生、发展、协调与消散的内在机制。

研究方法主要包括以下几个方面：

(1)通过腹腔注射法,提取BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞,按照Frangakis等(1982)的方法稍做改动分离小鼠小肠巨噬细胞。

(2)采用MTT法研究不同剂量和不同作用时间下,干酪乳杆菌EPS对小鼠单核巨噬细胞J774A.1及原代腹腔巨噬细胞增殖的影响。

(3)倒置显微镜下,观察干酪乳杆菌EPS对小鼠单核巨噬细胞J774A.1及原代腹腔巨噬细胞的形态学影响。

(4)用酶标仪和紫外可见分光光度仪分析J774A.1细胞及原代腹腔巨噬细胞吞噬中性红的量,生成NO、H2O2和02-·的量,研究EPS对腹腔来源巨噬细胞吞噬功能的影响。

(5)采用双抗体夹心ELISA法分析EPS对腹腔来源巨噬细胞和小肠巨噬细胞分泌促炎症因子IL-1β和TNF-α以及抑炎症因子IL-10的影响。

(6)用酶标仪和紫外可见分光光度仪分析小肠巨噬细胞吞噬中性红的量及生成NO的量,研究EPS对小肠巨噬细胞吞噬功能的影响。

结果：(1)EPS能显著的促进J774A.1细胞的增殖(P<0.05),当EPS浓度为400μg/mL时,处理J774A.1细胞48小时细胞增值率可达到197%±7.9,EPS也能阻止(脂多糖)LPS导致的J774A.1细胞生长的抑制状态,促进由LPS处理后细胞的生长,并且呈剂量依赖性,当EPS浓度为450μg/mL作用LPS处理后的J774A.1细胞48h细胞的增殖率达到185%±9.7；EPS对原代腹腔巨噬细胞的生长没有明显的作用,原代腹腔巨噬细胞在体外不能随着时间的延长而分化增殖,是有限细胞系,不同于无限细胞系的J774A.1细胞,LPS能微量的减少原代腹腔巨噬细胞的细胞数目,EPS能恢复LPS引起的原代腹腔巨噬细胞数量的减少,说明EPS可能是LPS的抑制剂。

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