DMEM低糖(含双抗)的注意事项和使用步骤！

            DMEM低糖(含双抗)的注意事项和使用步骤！

一、背景及概述

DMEM培养基是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型(低于4500mg/L)和低糖型(低于1000mg/L)。DMEM低糖(含双抗)内葡萄糖含量为1100毫克/升，高糖DMEM其内含量为4500毫克/升。DMEM低糖(含双抗)用于养干细胞可防分化，高糖DMEM可以养大多数哺乳动物的细胞，包括你养的卵巢上皮细胞。

二、注意事项

1、培养基长期放置，需要2-8℃避光保存，请勿低温冻存。

2、培养基中添加的L-谷氨酰胺在溶液中不稳定、易分解，长期放置后使用若发现细胞生长变慢可在使用前加入适量的L-谷氨酰胺，来维持细胞的正常代谢。

3、含有NaHCO3的培养基开瓶次数较多后，培养基内的CO2会逐渐溢出，PH值上升，培养基的颜色会偏紫色。培养基偏碱性会造成细胞生长停滞或死亡，建议分装成小瓶使用或用HEPES调至正常PH范围。

三、DMEM低糖(含双抗)使用步骤

一）准确称量试剂：根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必须纯净。

二）校正pH值：将称量好的培养基各种成分放入容器内，标记划线，加热溶解，补充水分，测定酸碱度，常用pH6.8～8.0的精密试纸或酸度计测定。用1NNaOH和1NHCl调节pH值到适宜范围内。

三）过滤：将玻璃漏斗置铁架上，再用DMEM低糖(含双抗)纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培养基倒入其中过滤至透明。

四）分装：将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内（试管内每支装5mL；三角瓶中装100～150ml），塞好棉塞用牛皮纸包扎好，准备灭菌。

五）灭菌：培养基的灭菌，常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死，但细菌的芽胞有较强的抗热性，须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理，即压力越大，蒸汽温度就越高。因此，在同一温度条件下，采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下，菌体吸收水分后，其蛋白质易于凝固变性，因为蒸汽的穿透力强，杀菌效果好。