小鼠成纤维细胞的应用和传代流程！

                  小鼠成纤维细胞的应用和传代流程！

一、背景

小鼠成纤维细胞分离自小鼠皮肤组织的贴壁细胞，成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞(mesenchymal cell)分化而来。功能活跃的细胞称为成纤维细胞。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。纤维细胞（fibrocyte），结缔组织中数目最多的细胞，相对静止的细胞称纤维细胞。

成纤维细胞数目最多，胞体大，为多突的纺锤形或星形的扁平细胞，细胞核呈规则的卵圆形，细胞轮廓不清，具有突起。其形态尚可依细胞的功能变化及其附着处的物理性状不同而发生改变。纤维细胞较小，呈多角形，胞质较少，弱嗜酸性，胞核亦较小，染色较深，电镜下粗面内质网较少，高尔基复合体不发达。

二、小鼠成纤维细胞传代流程

1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加1~2 ml 0.25%EDTA的胰酶消化（注意把握消化时间，通常控制在1~2min）。

2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁运动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落、吹散。

3、取出部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，于培养箱中培养。

4、注意培养基PH值变化情况，定期换液，待细胞密度达到70-80%时重复传代操作或者冻存。

三、应用

用于羊栖菜多酚分离纯化及对小鼠成纤维细胞抗紫外损伤影响研究：

运用Folin-Ciocalteu比色法对羊栖菜多酚含量进行测定,并对该方法进行了优化;然后利用酶辅助提取法对羊栖菜多酚进行提取,并对提取条件进行了优化;采用大孔吸附树脂法对羊栖菜多酚进行分离纯化,并对纯化条件进行了优化以获得高纯度的羊栖菜多酚,另外测定了其体外抗氧化能力。

通过羊栖菜多酚对UV照射的小鼠成纤维细胞的保护作用、修复作用及细胞内有关抗氧化酶的变化,研究了羊栖菜多酚对小鼠成纤维细胞抗紫外损伤的影响,为羊栖菜多酚在抗紫外损伤方面的应用提供了一定的理论依据和数据支持。

为了明确羊栖菜多酚对UV照射的小鼠成纤维细胞抗紫外损伤的影响,研究了UV辐射剂量、羊栖菜多酚浓度及时间对细胞生长的影响,结果表明UV辐射剂量越大,小鼠成纤维细胞受到抑制越严重,UV辐射剂量为0.15J/cm2时最接近半致死剂量,作为后续实验的UV照射剂量;羊栖菜多酚对小鼠成纤维细胞的保护作用随多酚浓度的增大呈现先增强后减弱的趋势,在羊栖菜多酚浓度为90μg/m L时保护作用最强。

从时间上看,加入羊栖菜多酚后培养4h再进行UV照射,保护作用最明显,随着时间的延长,保护作用开始下降。羊栖菜多酚对UV照射的小鼠成纤维细胞的修复作用,同样随着羊栖菜多酚浓度的增大呈先增强后减弱的趋势,在80μg/m L浓度时修复作用达到最强。此外,羊栖菜多酚能增强UV照射的小鼠成纤维细胞内超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性,并降低丙二醛的含量。