人脑动脉血管组织提取物的应用!
一、背景
人脑动脉血管组织提取物来自新鲜或冷冻人脑动脉血管组织可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。人脑动脉血管维持血管内外的动态平衡,合成和分泌细胞因子和介质,维持凝血和纤溶的动态平衡。
脑血管结构特点:1)脑外动脉属于肌型动脉,内弹力膜较厚,中膜及外膜较薄,弹力纤维较少,动脉搏动幅度较小,增厚的内膜可缓冲动脉对管壁的冲击,对脑起保护作用。脑外血管神经丰富,大的血管外膜有神经纤维束伴行,与血管收缩及舒张有关。2)脑动脉可分为中央支与皮质支,均垂直进入脑实质,二者在脑内有广泛的吻合支。3)血液与脑组织间存在血脑屏障(BBB),它由脑的连续毛细血管内皮及其细胞间紧密连接、完整的基膜、周细胞及星形胶质细胞脚板围成的神经胶质膜构成,内皮是BBB的主要结构。4)脑静脉壁薄,既无平滑肌又无瓣膜,脑静脉血管缺乏收缩功能。椎动脉、锁骨下动脉与颈外动脉侧支循环,包括椎动脉的寰椎动脉与颈外动脉的枕动脉吻合;锁骨下动脉的颈深动脉与颈外动脉的枕动脉吻合;左右颈深动脉间及左右枕动脉间吻合。各脑动脉终末支吻合,包括大脑前-大脑中动脉终末支间吻合,大脑前-大脑中-大脑后动脉终末支间吻合形成的侧支循环。
二、应用
用于脑动静脉畸形临床病理与血管平滑肌细胞的相关生物学研究:
脑动静脉畸形栓塞治疗后的组织病理及免疫组化研究目的分析人脑动静脉畸形(CAVM)栓塞治疗后的组织病理变化。方法对11例行血管内栓塞治疗术后再作手术切除的CAVM的病理资料进行分析,并应用增殖细胞核抗原(PCNA)、骨桥蛋白(OPN)、α—平滑肌肌动蛋白(α—SMA)、血管内皮生长因子(VEGF)等单克隆抗体进行免疫组织化学分析。
结果栓塞治疗后,CAVM血管腔内出现不同程度的血管内、外的炎性反应。表现为管壁及管周的淋巴细胞浸润、管腔内的内膜增生和异物巨细胞聚集等。部分被栓塞的血管腔内出现血管再通;免疫组化分析表明,新生内膜中SMA阳性染色,表明血管平滑肌细胞(VSMC)参与新生内膜的形成;OPN在新生内膜及异物巨细胞中有强阳性表达;畸形血管团周围组织中发现异常微血管,其内皮细胞PCNA阳性染色率高,并且VEGF呈阳性染色,表明有活跃的血管生成。栓塞治疗后,畸形血管周围组织中血管内皮细胞的增殖指数(19.6±8.4,%)高于作为对照组的出血性CAVM患者(10.1±6.2,%),差异有显著性意义(P<0.05)。结论栓塞材料引起血管不同程度的炎性反应,适度的血管反应有助于管腔的闭塞;栓塞的血管部分有再通现象;栓塞治疗后畸形血管团周边有微血管增生迹象。
VSMC是血管壁最主要的细胞成分,其生物学行为与CAVM的病理状态关系密切。本研究旨在建立一个稳定的人CAVM血管平滑肌细胞的培养体系,以作为体外研究的细胞学模型。
1、方法:取手术切除的人CAVM组织块用胶原酶消化法接种于铺有胶原底层的培养瓶中进行原代及传代培养,并对其进行形态学观察、免疫组化染色及透射电镜等一系列细胞定性研究。
2、结果:接种后6-8d后可见即可见少量细胞贴壁,原代培养的细胞呈长梭形,具有“峰”、“谷”样生长特征;免疫组化显示95%以上的细胞为SMA阳性染色,而CD34阴性染色;透射电镜检查发现培养的细胞具有肌丝及密斑等结构。从不同角度鉴定了所获细胞具有CAVM的特征,而且细胞纯度较高。细胞可以连续传代。
3、结论:应用酶消化法可获得纯化的血管平滑肌细胞,细胞可以连续传代培养。体外CAVM的血管平滑肌细胞可作为细胞学模型用于深入研究。
不同培养条件对体外脑动静脉畸形VSMC增殖和迁移的影响目的研究不同培养条件对体外CAVM的血管VSMC增殖、迁移的影响。方法应用细胞计数绘制生长曲线、MTT法检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养的人CAVM的VSMC增殖的影响,并应用用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹的方法分别检测它对VSMC表达骨桥蛋白(OPN)基因和蛋白的影响;用细胞迁移模型观察骨桥蛋白对VSMC迁移能力的影响。结果:细胞计数分析表明,bFGF作用于VSMC后,细胞增殖明显加速。
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