一步式RT-PCR Mix

一步式RT-PCR Mix

One-Step RT-PCR Mix

本产品是高效cDNA合成和PCR扩增的一步法RT-PCR试剂盒，用于以RNA为模板，通过特异引物合成cDNA之后，在DNA聚合酶的作用下通过PCR技术检测目标基因的含量。

产品特点：

• 实现一管式完成RT-PCR反应，避免样品交叉污染。
  

• 反应产物加入Loading Buffer后可以直接电泳检测。
  

• 本产品包含了cDNA合成以及PCR反应所必须的酶和反应体系，优化的Buffer体系最大程度的减少了反转录酶对扩增反应的抑制，提高了反应整体的敏感性。
  

• 本产品足够50次20μL体系的RT-PCR，只能用于科研目的。

产品组成：

保存：-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

• 样品RNA的制备用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的RNA提取试剂盒系列产品。
  

• 设置一管式RT-PCR反应（20μL体系）
  在N+1个干净的无RNase的PCR管中（N=样品数，另外一个是阴性对照。用户可以设置其他对照，样品数需相应增加），按下表加入各成分：
  

  成分	阴性对照管	样品管
  RNA模板（自备）	无	1-2μg
  上游引物（10μM）	0.5μL	0.5μL
  下游引物（10μM）	0.5μL	0.5μL
  RT Buffer,5×	4μL	4μL
  一步式RT-PCR Mix，5×	1.5μL	1.5μL
  DEPC-ddH2O	至20μL

  
  

• 轻柔混合均匀后放入PCR仪中进行RT-PCR。
  

• 设定RT-PCR反应条件时，一般将RT的条件设定成50℃ 30min，后接94℃预变性2min，94℃变性30 sec，退火50-60℃ 30 sec，延伸72℃ 1 kb/min，最后3步重复30-40个循环。终延伸72℃ 5-10min。

注意事项：

• 实验过程中请注意避免RNase污染。
  

• 除酶以外的各种试剂，使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度不均影响实验结果。
  

• RNA模板的完整性对cDNA合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的RNA提取/纯化方法。
  

• 如果扩增片段较长或者RNA结构复杂，可以将RNA单独置于65-70℃加热5-10min后再加入体系。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！