添加蛋白酶抑制剂是大多数细胞裂解和蛋白质提取的必要步骤。蛋白质提取过程中,内源性蛋白酶会降解蛋白质,导致蛋白质产量的降低。在裂解试剂中加入蛋白酶抑制剂,可防止提取蛋白的降解,确保在细胞裂解后获得蛋白质的产量。
蛋白酶抑制剂是生物或化学化合物,其作用是可逆或不可逆地结合蛋白酶。大多数已知的蛋白酶属于四个进化上不同的酶家族之一,基于功能基团参与肽键的裂解。一般情况下,蛋白提取过程中总是需要使用蛋白酶抑制剂。大多数情况下,需使用几种不同抑制剂化合物的混合物(也称Cocktail,鸡尾酒),以确保蛋白质提取物在分析之前不会降解。
常见蛋白酶抑制剂活性组分
抑制剂 | 分子量 | 靶点 | 机制 | 溶解度(溶剂) | 工作浓度 |
---|---|---|---|---|---|
氟化钠 | 42 | 丝氨酸/苏氨酸和酸性磷酸酶 | 不可逆 | 40mg/mL (H2O) | 1 to 20mM |
原钒酸钠 | 183.9 | 酪氨酸和碱性磷酸酶 | 不可逆 | 20mg/mL (H2O) | 1 to 100mM |
β-甘油磷酸钠(二钠盐) | 216 | 丝氨酸-苏氨酸磷酸酶 | 可逆 | 10mg/mL (H2O) | 1 to 100mM |
焦磷酸纳 | 221.9 | 丝氨酸-苏氨酸磷酸酶 | 不可逆 | 65mg/mL (H2O) | 1 to 100mM |
AEBSF•HCl | 239.5 | 丝氨酸蛋白酶 | 不可逆 | 200mg/mL (H2O) | 0.2 to 1.0mM |
抑肽酶 | 6511.5 | 丝氨酸蛋白酶 | 可逆 | 10mg/mL (H2O) | 100 to 200nM |
Bestatin | 308.4 | 氨肽酶 | 可逆 | 5mg/mL (MeOH) | 1 to 10µM |
E-64 | 357.4 | 半胱氨酸蛋白酶 | 不可逆 | 20mg/mL(1:1 EtOH:H2O) | 1 to 20µM |
EDTA | 372.2 | 金属蛋白酶(螯合阳离子) | 可逆 | 10g/100mL (H2O) | 2 to 10mM |
亮抑酶肽 | 475.6 | 丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶 | 可逆 | 1mg/mL (H2O) | 10 to 100µM |
Pepstatin A | 685.9 | 天冬氨酸蛋白酶 | 可逆 | 1mg/mL (MeOH) | 1 to 20µM |
PMSF | 174.2 | 丝氨酸蛋白酶 | 可逆 | 18mg/mL (MeOH) | 0.1 to 1.0mM |
常用蛋白酶抑制剂混合物组成
抑制剂 | 工作浓度 | 靶点 |
---|---|---|
AEBSF | 1mM | 丝氨酸蛋白酶 |
抑肽酶 | 800nM | 丝氨酸蛋白酶 |
Bestatin | 50μM | 氨肽酶 |
E-64 | 15μM | 半胱氨酸蛋白酶 |
亮抑酶肽 | 20μM | 丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶 |
Pepstatin A | 10μM | 天冬氨酸蛋白酶 |
EDTA* | 5mM | 金属蛋白酶(螯合阳离子) |
*EDTA影响蛋白活性时,需实验是否需要添加EDTA
产品号 | 产品名称 | 规格 | Cas | 包装 |
---|---|---|---|---|
S118142 | 氟化钠 | 昆虫细胞培养级, ≥99% | 7681-49-4 | 100g,500g |
D106347 | β-甘油磷酸钠五水合物 | >95.0%(T) | 13408-09-8 | 25g,100g,500g |
S108847 | 焦磷酸钠 | AR,99.0% | 7722-88-5 | 500g,20*500g,2.5Kg |
A301905 | AEBSF溶液 | 50mg/ml in H2O | 30827-99-7 | 0.5mL,1mL |
A301913 | AEBSF溶液 | 10mg/ml in H2O | 30827-99-7 | 0.5mL,1mL |
A301991 | 抑肽酶溶液 | 1mg/ml in water | 9087-70-1 | 1mL |
B113164 | 乌苯美司(Bestatin) | 超纯级,>99% | 58970-76-6 | 10mg,100mg,50mg,500mg,1g |
E109034 | E-64 | 蛋白酶抑制剂,99% | 66701-25-5 | 5mg,25mg,100mg |
E112489 | 乙二胺四乙酸(EDTA) | 99%,用于细胞培养 | 60-00-4 | 100g,500g |
L111765 | 亮抑酶酞 | ≥90%(HPLC) | 103476-89-7 | 1mg,5mg,25mg,100mg |
P113168 | 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin A) | ≥75% (HPLC) | 26305-03-3 | 5mg,10mg,25mg |
P105539 | 苯甲基磺酰氟(PMSF) | ≥98.0% (GC) | 329-98-6 | 5g,25g,100g |
P301906 | PMSF溶液 | 100mM in ethanol | 329-98-6 | 1mL |
P301902 | 蛋白酶抑制剂混合物 | 100×,不含EDTA | - | 1mL |
P301903 | 蛋白酶抑制剂混合物 | 100×,无动物源性 | - | 1mL |
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