鳞状上皮细胞英文名称：squamous cell分类：三层，即基底层、中层、表层腺上皮：腺体分为外分泌腺和内分泌腺被覆上皮：更具有分泌功能复层上皮：复层扁平上皮作用：保护、替代、监测鳞状上皮细胞是一种多层上皮细胞，一般有10余层，细胞形态多呈扁平鳞形，边界清晰，主要覆盖于皮肤、口腔、咽、食管、阴道的全部及子宫颈外口等体表与外界相通的腔道部位。从底层至表面分为基底层、中层和表层3部分。中文名称鳞状上皮细胞英文名称squamous cell腺上皮腺体分为外分泌腺和内分泌腺概述上皮细胞组织的一种被覆上皮更具有分泌功能复层上皮复层扁平上皮鳞状上皮细胞是什么鳞状上皮细胞又称扁平上皮细胞，主要来自输尿管下部、膀胱、尿道和阴道表层及子宫，其表面均被覆鳞状上皮细胞，该上皮的生长、分化主要受卵巢所产生的雌激素影响，而孕激素的作用是促使上皮细胞脱落。鳞状上皮细胞是组织胚胎学上的一个专业名称，属于上皮细胞组织的一种，肉眼一般看不到，需要才显微镜下才能发现，形态为不规则多边的圆形，好像鱼鳞状，故而得名，细胞核比较小，细胞胞浆宽广。鳞状上皮细胞组成根据大小分为表、中、底三层。①该细胞为尿路脱落细胞中最BIG的一种;②外形呈不规则圆形，多边、常折叠，似鱼鳞状;③核小，有时2个小核，部分无核;④胞浆宽广。增多提示炎症  。鳞状上皮细胞作用鳞状上皮细胞的意思是为人体正常的上皮组织，主要分布在膀胱、尿道、输尿管、阴道以及宫颈，鳞状上皮细胞对人体组织与器官起到保护、替代、监测作用。1.保护：鳞状上皮细胞可保护宫颈、阴道等部位，在受到炎性物质刺激时可起到保护作用。2.替代：可由宫颈柱状上皮转化为鳞状上皮并被其取代。3.监测：在进行宫颈刮宫检查时，可刮去宫颈组织进行检验，看有无异型性增生，可提示有无癌前病变的发生。鳞状上皮细胞各层细胞特征鳞状上皮细胞分类正常成年妇女阴道上皮细胞分为三层，即基底层、中层、表层  。基底层细胞基底层细胞按其外形及核浆比又可分为内底层细胞和外底层细胞。1)内底层细胞内底层细胞为上皮细胞中最小、最幼稚的细胞。细胞呈圆形，胞浆嗜碱性，染深蓝色，细胞核较大，核浆比为1：1。大小为白细胞的4～5倍。2)外底层细胞外底层细胞呈圆形或卵圆形，大小约为中性多叶粒细胞的8~10倍。染浅蓝色，核浆比为1：(2～3)。中层细胞中层细胞相当于组织学上的棘层细胞，系由底层向表层的过渡型。外表呈船形或梭形，又称为舟状细胞，胞浆染淡蓝色，核浆比为1:(3～5)。此类细胞妊娠时较多见  。表层细胞表层细胞外形呈大方块多边形，根据胞浆和胞核的不同特征又可分为以下两型。1)网状核表皮细胞网状核表皮细胞又称为角化前细胞，呈大方块多边形，有钝角，胞浆丰富，染淡蓝色，细胞核染色质疏松，呈网状。观察卵巢功能时将其列入中层，故又称为大中层细胞。2)固缩核表皮细胞核固缩变小，染色质致密深染，胞浆可染成粉红色或淡蓝色。上皮细胞形态变化规律有如下三点：①细胞体积由小变大②细胞核由大变小③胞浆染色由嗜碱性(蓝染)变嗜酸性(红染)  。

细胞培养中遇到细胞空泡化怎么办？1、细胞老化：细胞处于终末分化状态，或细胞传代次数过多，老化严重。2、pH值：培养液的pH值与细胞正常所需pH值差别太大。3、胰酶消化：胰酶消化时间过长或消化细胞吹打时力度过大。4、自噬：细胞缺乏营养导致饥饿，诱导形成自噬。5、细胞代谢：血清浓度不够，药物作用、外界刺激等导致细胞代谢出现问题。6、污染：衣原体感染、支原体污染、病毒污染。重点来了，怎么处理？具体问题具体分析。1、若是因为细胞老化，可复苏代数靠前的细胞进行培养。2、若是pH更换，培养液调整到合适的pH值。3、传代时，胰酶的浓度合适，选取适当的消化时间进行消化，避免吹打太过用力4、保证细胞培养的营养充足。可通过增加血清浓度和在培养基中加入谷氨酰胺。5、严格进行无菌操作。尽量使用质量好和渠道正规的胎牛血清。

Vero细胞（非洲绿猴肾细胞）英文名称：Verda Reno;Vero发现人：Yasumura 和 Kawakita发现时间：1962年3月27日产地：非洲  年龄：成年组织来源：正常肾：特性：贴壁生长，上皮细胞样 　　非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）是非洲绿猴肾细胞，是一种异倍体细胞，经猕猴肾细胞培养衍化后产生的，和著名的Hela细胞系、犬肾细胞（MDCK细胞）一样是常用的细胞系。　　非洲绿猴肾细胞用于疫苗生产中的病毒培养基质细胞，是在限定代次内不致癌的异倍体细胞， 世界卫生组织批准可以用于人类疫苗的生产基质。科兴生物和中国生物的新冠疫苗是用非洲绿猴肾细胞作为培养基质细胞的。       中文名称非洲绿猴肾细胞英文名称Verda Reno；Vero      发现人Yasumura 和 Kawakita发现时间1962年3月27日      产地非洲年龄成年      组织来源正常肾生长特性贴壁细胞      细胞形态上皮细胞样　　>>>> 简介　　Vero细胞系是从非洲绿猴的肾脏上皮细胞中分离培养出来的。这个细胞系由日本千叶大学的Yasumura 和 Kawakita 于1962年3月27日扩增出来，1964年6月15日B. Simizu将其从千叶大学带到国立健康研究所（NIH）国立过敏及传染病研究所热带病毒实验室时，已传至第93代。该细胞系取"Verda Reno"（世界语意为"绿色的肾脏）的简写而命名为"Vero"，而"Vero"本身在世界语中也有"真相"的意思。　　>>>> 用途　　Vero细胞用途广泛　　1.vero细胞用于检查大肠杆菌毒素。大肠杆菌毒素最初就因此细胞系而被命名为Vero毒素，后来被称为志贺菌素样毒素，因为它与在痢疾志贺菌中分离出来的志贺菌素很相似。　　2.作为培养病毒的细胞宿主。比如：测定某种药物对病毒复制速度的影响，检验是否存在狂犬病毒或者为了研究目的培养病毒。　　3.作为真核寄生虫的宿主细胞，尤其是锥体虫属。　　4.用于疫苗生产中的病毒培养基质细胞，是在限定代次内不致癌的异倍体细胞，WHO批准可以用于人类疫苗的生产基质。　　Ver细胞在疫苗用途　　非洲綠猴肾细胞（Vero细胞）是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的疫苗生产细胞系。其来源方便，可连续传代，生长速度快;对多种病毒的感染敏感、病毒增殖滴度高;遗传性状稳定,恶性转化程度低，生物安全性较高，培养条件要求不苛刻，易于在生物反应器实施大规模培养而被广泛使用。随着对疫苗质量和安全性要求的不断提高，尤其是疫苗的接种对象主要是大范围的健康人群，因此其质量和安全性一直是备受关注的首要问题。疫苗的质量和安全性在很大程度上取决于疫苗的生产方式及其过程。用无血清培养基取代含血清培养基培养，Vero 细胞已成为病毒疫苗生产的一个重要发展趋势。　　Ver细胞的疫苗现状　　Vero细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的疫苗生产细胞系。与用作疫苗生产的原代细胞、二倍体细胞和其他一些传代细胞基质相比，Vero细胞具有以下特点　　① 来源方便， 可连续传代，生长速度快　　② 对多种病毒的感染敏感、病毒增殖滴度高　　③ 遗传性状稳定，恶性转化程度低，生物安全性较高　　④ 培养条件要求不苛刻, .易于在生物反应器实施大规模培养。　　Vero细胞生物制药包括　　(1)  疫苗生产：如病毒性疫苗（肝炎病毒疫苗等）、肿瘤疫苗（多肽疫苗）等。　　(2) 基因工程药物生产：如在临床医学中具有治疗价值的- -些细胞生长因子如干扰素、粒细胞生长因子、胸腺肽等。　　(3) 诊断用和药用单克隆抗体生产。　　(4) 细胞工程药物生产：生物细胞内的一- 些生物活性多肽，生物活性物质等。　　>>>> 特性　　Vero细胞系是连续的非整倍体细胞 。连续细胞系可以经过许多分裂周期而不衰老。非整倍体是指细胞中的染色体数目与通常的不同。Vero 细胞有干扰素分泌缺陷的特点;与其它普通哺乳动物细胞不同，当被病毒感染时，它不能分泌干扰素，但它仍然具有α/β干扰素的受体，所以对于其它来源的干扰素仍有正常的反应。 

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双十一沪震生物各位小伙伴们期待已久沪震“双十一”活动来啦！让大家久等了。。。今年双十一有哪些主要活动安排呢？本次双十一，有哪些超值好物等待大家呢？咱们话不多说，直接开始进入正题吧活动时间2022年11月11日-2022年12月31日活动一：ELISA试剂盒01买10盒以下享受7.5折优惠02买10盒以上享受7折优惠活动二：细胞系01每买一株细胞系送1瓶无血清细胞冻液活动三：常用实验试剂买一送一产品列表如下：（数量有限，先到先得！！！）产品名称货号价格无血清细胞冻存液HZC53-100￥380快速转膜液500mlHZ54500W￥228通用抗体稀释液100mlHZA55100￥24520×TBST缓冲液500mlHZ57871￥160

定   义信号肽是引导新合成的蛋白质向分泌通路转移的短（长度5-30个氨基酸）肽链。发   现1972年Milstein等发现免疫球蛋白IgG轻链的前体要比成熟的IgG在N-端多20氨基酸。他们推测这20个氨基酸可能和其通过ER进而分泌有关。美国Bloble实验室完成三项重要的实验支持了以上推测：将IgG的mRNA在无细胞系统中，以游离核糖体体外合成时产生的蛋白是IgG的前体；若在无细胞系统中加入狗胰细胞的RER，就能产生IgG成熟蛋白。成熟的IgG轻链蛋白和前体蛋白相差的20个aa是疏水性很强的氨基酸；加入蛋白水解酶不能使正在合成的IgG水解，而同时加入去垢剂就可以使其水解。由于蛋白酶只能作用于游离的蛋白而不能作用与膜结合的蛋白，所以表明IgG合成可能和RER的膜是结合的，而用去垢剂可将其和膜分离才得以水解；用去垢剂处理骨髓瘤后所获得的多核糖体与膜分离，然后在离体的条件下继续进行新生肽的合成。经短时温育得到的是成熟的IgG，而长时温育得到的是前体IgG，此表明mRNA5’端核糖体上合成的新生肽尚未来得及加工，而在3′端核糖体上合成的新生肽在核糖体未分离前已部分进入rER，经过了加工，切除了N-端的部分。在以上实验的基础上Bloble和Dobberstin（1975）提出了信号假设（signalhypothesis），认为分泌蛋白N-端有一段信号肽，当新生肽长约50-70aa后，信号肽从核糖体的大亚基中露出，立即被RER膜上的受体识别并与之结合。在信号肽越膜进入RER内腔后被信号肽酶水解。正在合成的新生肽随着信号肽通过RER膜上的蛋白孔道穿过脂双层进入RER腔内。这一假设经过多年的继续研究又有了新的发展，但基本观点仍是正确的。Bloble因这项成就而荣获了1999年度诺贝尔生理学或医学奖。结    构信号肽位于分泌蛋白的N端。一般由15～30个氨基酸组成。包括三个区：一个带正电的N末端，称为碱性氨基末端：一个中间疏水序列．以中性氨基酸为主，能够形成一段d螺旋结构，它是信号肽的主要功能区；一个较长的带负电荷的C末端，含小分子氨基酸，是信号序列切割位点．也称加工区。当信号肽序列合成后，被信号识别颗粒(SRP)所识别，蛋白质合成暂停或减缓，信号识别颗粒将核糖体携带至内质网上，蛋白质合成重新开始。在信号肽的引导下，新合成的蛋白质进入内质网腔．而信号肽序列则在信号肽酶的作用下被切除[21。如终止转运序列存在于新生肽链的C端．也可以不被信号肽酶切除．如卵清蛋白含有内部信号肽。它的前体与成熟形式都没有被信号肽酶切除的过程．其N一端氨基酸结构在第9位有带电基团，疏水结构并不明显。应   用随着对生物疗法和重组蛋白的需求日益增加，一些原核和真核宿主已被广泛用于表达重组蛋白。然而，重组蛋白的大规模生产存在一些障碍，其中包涵体的形成和蛋白酶降解蛋白质是重要因素。另一方面，内源性蛋白可能会干扰重组分泌蛋白的折叠。上述因素以及复杂的蛋白生产的下游纯化过程，都会导致蛋白产量的损失。而且，重组蛋白的产量不仅与表达水平有关，还与转位效率（translocation efficiency）有关。分泌机制和信号肽，决定了转位的能力和效率。利用来自异种的替代信号肽可以提高转位效率。研究表明，信号肽的使用将蛋白质产量提高到具有商业意义的水平。除了重组蛋白的生产外，信号肽在其他方面也具有特殊的重要性。在枯草芽孢杆菌的胞外蛋白中，大约50%的蛋白质含有典型的信号肽。大肠杆菌中90%以上的分泌蛋白依赖于信号肽。大量的真核生物分泌蛋白(占小鼠和人类蛋白质组的20%以上)也含有信号肽。不同类群中信号肽所占比例较大，说明了其研究意义。此外，大量的人类疾病是由信号肽突变引起的。功   能SRP(信号肽识别粒子)有三个重要的功能:(1)它能和新生的分泌蛋白的信号肽相结合;(2)还能和位于膜上的蛋白受体相结合;(3)延伸制动。SRP活性能在体外由单个成分获得再生。其实有功能的SRP可由一种7SRNA和其它一些蛋白组装而成。像其它转运和跨膜蛋白一样，SRP普遍存在于真核生物中。SRP和SRP受体二者的催化功能是将带有新生肽的核糖体转移到膜上。di一步是信号肽被SRP识别。然后SRP和其受体结合，核糖体结合到膜上。SRP受体在蛋白质转运中的作用是短暂的。当SRP和信号肽结合时，它阻止了翻译。蛋白合成停止。这是在新合成的多肽链长70aa左右时发生的。(这样25-30残基的信号肽伸在核糖体外面，相邻的约40个aa仍在核糖体中)。当SRP与其受体结合时，SRP释放出信号肽，然后核糖体和膜上的其它成分(尚未鉴别出)结合，此时翻译得到恢复。当核糖体被传递到膜上时，SRP及其受体的作用已完成了，又进入新的循环。再自由地发动另一些新生肽和膜的结合。此SRP7SRNA可分成两部分:5′端的100个碱基和3′端的45个碱基，这一段和AluRNA顺序密切相关，因此定义为Alu结构域(Aludomain)。RNA余下的部分由SRNA功能域(sRNAdomain)构成。RNP不同的部位对于靶蛋白具有相应三种功能。在体外用SRP的识别来研究每部分的功能。54KDa的蛋白只有一个分子，它不直接和RNA结合。而是和19KDa的蛋白结合，19KDa蛋白与RNA的两个未端结合。P54用来识别信号肽;P68/72双体结合于RNA的中心区域，它是用来识别SRP的受体及蛋白的越膜转运。P9/14二聚体结合在此RNA分子另一端的附近。它负责延伸制动。SRP的受体是含有72Kda和30KDa两个亚基的二聚体。大亚基的N-端锚定在ER中，蛋白的大部分伸在胞液中，蛋白的此区域的大部分顺序与核结合蛋白相似，带有很多正电荷的aa，表明SRP受体识别SRP中的7SRNA。为什么协同翻译的蛋白进入内皮网状系统，而翻译后转运的蛋白就要进入线粒体和叶绿体呢?还没有充分的证据来明确回答此问题，且在酵母中输入ER的蛋白却发生在翻译后转运，这使问题更为突出。两种过程对能量的需求是不同的。转运到线粒体或叶绿中需要一种电位差，而进入ER时需ATP。这并不意味着蛋白系统的作用涉及到能量的提供。核糖体的存在对于在协同翻译转运中维持蛋白进入膜中时的正确几何形状是需要的。

前言　利用组织样本来进行Western blot，这是许多实验室常常开展的工作。不过，若是想获得重复可靠的印迹结果，也绝非易事。在此，Bio-Rad的专家贡献了一些经验，可以帮助您获得清晰的图像和可靠的数据。1. 快速处理组织　使用干净的工具来收集和处理组织样本。为了去除可能影响蛋白稳定性的污染物，用预冷的中性缓冲液简单洗涤。洗涤后，在液氮中快速冷冻组织，以便保留蛋白的结构和特征，比如翻译后修饰（PTM）。组织样本可保存在冰上，立即匀浆处理。若保存在 –20°C，蛋白仍然有可能降解，因此组织样本要放在–80°C长期保存。2. 精心挑选裂解液　在选择较佳的裂解缓冲液时，应考虑pH值、离子强度、去污剂和变性剂类型等因素。放射免疫沉淀分析缓冲液（RIPA）是最广泛使用的裂解液。同时，在选择过程中也要考虑目标蛋白的定位，例如，细胞质蛋白建议选用Tris-HCl裂解液，而核蛋白则选择RIPA。在富集各个组分的低丰度蛋白时，可能需要对组织组分进行预先分离。裂解液的用量取决于组织的大小/重量；缓冲液与组织的比例对确保有效裂解很关键。3. 选择破碎方法　与细胞相比，组织需要更剧烈的破碎方法，如匀浆技术。为了进一步解离组织并剪切细胞DNA，可能需要对样本进行超声处理。这一步要避免起泡，因为它会降低回收率。同时，脂质会影响western blot的质量，要尽量去除。从植物组织中提取蛋白也颇具挑战性，因为它们富含蛋白酶，还含有大量可能干扰蛋白提取的代谢物。您必须针对特定的植物组织来优化提取过程。4. 抑制蛋白降解　细胞膜的破坏会释放出可降解蛋白质的酶。为了限制蛋白酶的活性，可以向缓冲液中加入尿素等强变性剂，不过这些条件可能会影响某些蛋白质的完整性，因此，裂解液中通常含有蛋白酶抑制剂混合物。常用的蛋白酶抑制剂包括PMSF、抑肽酶、亮抑酶肽和胃蛋白酶抑制剂。SUMO化蛋白的鉴定可能特别有难度，因为去除SUMO的异肽酶存在，并且通常只有一小部分蛋白被SUMO化。为了保留SUMO化，建议在裂解液中加入异肽酶抑制剂。去泛素化酶（DUB）的存在也会去除泛素结合物。因此，必须向细胞裂解液中加入EDTA或EGTA，以及碘乙酰胺（IAA）或N-乙基马来酰亚胺（NEM）。IAA和NEM的使用浓度通常为5-10 mM。不过，某些蛋白可能需要更高的浓度，比如IRAK1。5. 定量您的样本　测定样本浓度，可确保每块凝胶的上样量相同，并方便比较各个样本之间的蛋白水平差异，比如处理和未处理样本，或实验各个阶段的样本。您可以采用Bradford分析来进行总蛋白的标准化。不过，如果样本中包含不可溶和可溶蛋白，则Bradford方法不可靠，再次强调了均质化的重要性。6. 选择较好的凝胶　较好是根据目标蛋白的分子量来选择聚丙烯酰胺的百分比。例如，高分子量蛋白选择低的百分比，而低分子量蛋白选择高的百分比。如果您希望检测单个蛋白质，选择非梯度胶。如果是检测一系列不同大小的蛋白，则建议选择梯度胶。电压太高，可能会引起“微笑”条带。为了避免这种情况，建议在冷库中跑胶，并使用预冷的缓冲液。7. 验证蛋白上样　根据您的蛋白在细胞中处于哪个位置，可选择较佳的上样对照。对于细胞质中的蛋白，常用的对照是看家蛋白β-肌动蛋白或β-微管蛋白；对于核蛋白，通常使用组蛋白H1或组蛋白H3。不过，近年来许多研究表明最常用的看家蛋白不适合蛋白的归一化，强调生理和病理因素可能影响它们的表达水平。另一个问题是看家蛋白往往超出了检测的动态范围。Bio-Rad的免染（stain-free）成像技术则是一种很好的替代。这种技术利用总蛋白来进行归一化，有助于消除实验误差，得到更可靠的结果。它无需染色，利用掺入凝胶的三卤化合物，让蛋白质在光活化时发出荧光。与丽春红染色相比，免染技术扩大了线性检测的范围，并降低了实验的可变性。此外，转印后也无需染色，非常方便。8. 选择合适的膜　蛋白质可转印到硝酸纤维素（NC）膜或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。PVDF膜的机械强度更高，特别适合膜的剥离和再次结合。PVDF膜是疏水性的，需要在甲醇中预浸泡。NC膜的信噪比高，不需要甲醇预处理。需要注意的是，NC膜不能与含有SDS的转移缓冲液一起使用。在选择转印膜时，您可能还需要考虑其他参数，比如孔径。9. 降低内源背景　在对组织裂解物进行western blot检测时，内源IgG的信号和非特异性二抗结合可能会掩盖低丰度的蛋白或某种分子量的蛋白。~50 kD和~25 kD的蛋白尤其需要注意，它们可能被变性IgG的重链和轻链所掩盖。对于胸腺或甲状腺等组织，这个问题尤为明显，因为它们含有大量的内源IgG。10. 采用适当的对照　为了确保一抗的特异性，必须使用阳性和阴性的组织对照。对于阳性对照，使用已知表达高水平目标蛋白的组织。推荐的阴性对照包括仅使用二抗（省略一抗孵育步骤）以及已知不表达目标蛋白的组织样本。此外，疾病状态下特定蛋白质的表达也会出现差异。为了解释这些差异，较好使用健康组织和疾病组织的样本。以上内容来源网络

抗体纯化抗体作为一种常见的生物学研究工具，高特异性、高效价的抗体是进行科研实验研究的基础，抗体纯度的高低将直接影响实验的成败。通过不同方法制备的抗体往往与多种杂蛋白混杂在一起，为了获得成分相对单一的抗体，需要进行抗体纯化。图1：抗体纯化流程图Protein A层析蛋白A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，分子量42 kD，它含有5个可以和抗IgG分子的Fc段特异性结合的结构域。20世纪70年代初期，细菌蛋白开始作为纯化免疫球蛋白的方法出现。细菌蛋白对抗体的高亲和力使其成为用于检测和纯化抗体一种强有力的工具。其中，金黄色葡萄球菌蛋白A (staphylococcal protein A) 和链状球菌蛋白G (streptococcal protein G) 是最为常见的两种用于纯化全长抗体的配体，它们能够与不同物种或不同亲和力的抗体结合。金黄色葡萄球菌蛋白A，简称protein A，来源于革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌表面。天然的protein A含有5个同源免疫球蛋白 (大多数为IgG) 结合域（E, D, A, B和C）可以与抗体的Fc区特异性结合 (CH2与CH3之间)。此外，protein A也可结合抗体重链可变区的CDR2与CDR3之间。Protein A的分子大小约为42kDa，对于大部分物种的IgG都具有较高的亲和力。研究表明，一个protein A分子可以同时结合至少2个IgG分子。天然protein A作为配体被偶联在琼脂糖介质上，这样它的结合域便可用来捕捉和结合IgG。虽然天然protein A与IgG的亲和力很强，但它会和非目的蛋白结合，则最终会导致蛋白的纯度下降，因此达不到标准。于是，重组protein A在基于天然protein A的基础上进行了一定程度的基因工程技术改造，但这并不影响重组protein A对于免疫球蛋白Fc区的特异性，在增强其抗体的结合能力同时，纯化效果也得到了显著地提高。图2. Protein A结构Protein G层析亲和层析填料与抗体结合的蛋白G是一种源自链球菌G族的细胞表面蛋白，为三型Fc受体。其通过类似于蛋白A的非免疫机制与抗体的Fc段结合。像蛋白A一样，蛋白G可以与IgG的Fc区域特异性结合。不同的是，蛋白G可以广泛且更强地结合更多类型的IgG，多克隆IgG及人IgG，同时血清蛋白结合水平更低，纯度更高，配基脱落也比较低。此外，蛋白G还可以和某些抗体的Fab和F (ab')2段结合。Protein L层析Capto L层析填料将蛋白L偶联于高流速琼脂糖骨架，蛋白L特异性结合kappa轻链的可变区，因此Capto L也可以用于相应的IgA、IgD、IgG和IgM等抗体纯化，对于包括人、大鼠和小鼠在内的不同种属抗体具有亲和作用，具有高载量、高纯度的特点。Protein L 是从马格努斯消化链球菌分离出来的能和免疫球蛋白特异性结合的蛋白质，与 A、 G 不同的是， Protein L 专一性结合抗体轻链部分。蛋白 L 结合更宽范围的抗体类大于蛋白 A 或 G 蛋白 L 结合所有抗体类，包括 IgG，IgM，IgA 的，IgE 和 IgD 的代表。尽管有很宽的结合范围内，蛋白质 L 不是一个通用的抗体结合蛋白。L 蛋白结合仅于那些含有κ轻链的抗体，在人类和小鼠抗体，抗体分子除了包含κ轻链，其余有ι轻链。例如，它结合人 VκI，VκIII 和 VκIV 亚型但不结合 VκII 亚型。IgM和IgY的纯化HiTrap IgM Purification HP是预填充了偶联至Sepharose High Performance的亲硫吸附填料，产品为1 mL层析柱，可快速且高效地纯化单克隆IgM。HiTrap IgY Purification HP是5 mL层析柱，预填充了偶联至Sepharose High Performance的亲硫吸附填料，可快速、轻松地从蛋黄中纯化IgY。图3：使用HiTrap IgM Purification HP纯化淋巴瘤细胞培养的IgMCapto家族层析技术应用于抗体纯化的核心技术，一般采用经典的三步纯化策略：粗纯-中度纯化-精细纯化。其中，中度纯化和精细纯化主要去除特定的杂质，如HCP、DNA、聚集体和变体等，常用的层析技术有离子交换、疏水层析等，达到最终治疗抗体所需的纯度。与传统的SP，Q Sepharose FF介质相比，新型的Capto S ImpAct、Capto Q系列离子交换层析填料刚性更好且流速更快，同时交联了非常“柔软”的葡萄糖链使得填料介质在高流速下的动态载量大大增加，有利于提高生产效率，降低成本。同时，复合模式层析填料Capto MMC、Capto adhere等产品的推出，使得抗体纯化的工艺流程得到了优化和提升。尤其是Capto adhere，可以使得抗体纯化工艺向两步法层析技术演变，简化了操作步骤，提高效率。其  他随着时代的进步，以及药物法规的不断完善，抗体纯化工艺中的其他问题，如核酸、内毒素等其他工艺问题也为生产带来了一定的挑战。近年来蛋白质组学和结构基因组学技术的蓬勃发展，也给抗体研究带来了更多的机遇和挑战。

cDNA 在反转录界一直大名鼎鼎，但 TA 鲜少抛头露面！那我们怎样才能辨别出 TA 的身份呢？按理来说，RNA 的质量没问题（28 s 和 18 s rRNA 清晰、明显，亮度比符合 2:1），那么反转录产生的 cDNA 一般是不会出现问题的。(来源于网络）和小编一起来听听学霸们怎么说？一般都可以用电泳检测是否合成适当大小片段的带，如果你是想看它的大小肯定可以，如果想看他碱基有没有出错当然还是测序或者使用探针检测，就是比较麻烦。用PCR检测合成的cDNA中管家基因的量，如果出现比较好条带，基本可以证实你的cDNA没有问题，我们实验室一致这样控制。如果不怕烦的话，可以在转第一链时加入少量同位素标记的dNTP，然后看一下放射比活度或做个放射自显影。也可在合成双链后跑电泳看一下。做内参照啊！如GAPDH,β－actin,β-MG等。这么多学霸出谋划策，你，懂了吗？那小编给大家做了总结，汇报如下，请各位霸霸查收～选择试剂盒：您做反转录实验想得到什么样的产物？如何检测第一链cDNA合成成功？01cDNA电泳检测取约5ul反应产物，在1%琼脂糖凝胶上电泳，EB染色，紫外成像检测，呈现出大小在200-10Kb的拖带，其中重心区域小1-4Kb之间，这说明反转录完全，得到了高质量的cDNA02cDNA测序全长双链cDNA做分子克隆实验，然后通过测序结果精确判断。Oligo(dT)18和Random Primers按比列使用可解决poly(A) mRNA模板限制和长度限制的问题序列特异性引物可获得你想要得目的序列03探针检测qPCR或RT-qPCR步骤04管家基因/内参基因以反转录产物为模板，扩增内参基因，扩增有结果，说明cDNA的质量基本可以保证，这个方法限制于随机引物扩增（因为管家基因片段多数较短）。而Oligo(dT)18与序列特异性引物扩增或我们做LD PCR（2kb、10kb等长片段）时，这些内参扩增的几率远大于全长或大片段cDNA的扩增，这时可能就无法通过内参来检验cDNA扩增结果的好坏。05同位素标记反转录中加入少部分同位素标记的dNTP放射比活度或放射自显影检测

免疫学三大工具，IHC、Western blot、ELISA，分别用于定位，定性和定量！IHC（免疫组化）是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光剂，酶、金属离子、同位素）显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究（主要是定位）。样本是细胞货组织，要再显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性ELISA（酶联免疫吸附实验）用到了免疫学原理和化学反应显色，代测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附再载体上，这就是“吸附”的含义。免疫组化和ELISA所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而再操作方法上有所不同。ELISA多用于定量分析，其灵敏度非常高。Western blot（蛋白质印迹法）先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和定量。1、对于IHC来说，定位是免疫组化的优势该方法可在组织和细胞中进行抗原的准确定位, 因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定位较直接准确、定性灵敏度高，是定位检测分析方法对病理学领域开展深入研究是十分有意义，尤其对于有些因子的转位研究十分有用。2、WB与IHC技术相比，定量可能更加准确当然WB也可定性和定位(通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反映它们的定位)，但敏感性远远低于IHC。3、ELISA与IHC相比，定量最准确，是分泌性蛋白检测方法之一。尤其对于微定量分析多个样本非常有用，所用试剂和样品量很少，结果精确。IHC针对性比较强，而且一般是以组织或者细胞为样本，而ELISA一般是使用血清或者组织磨碎液。免疫组化可以快速检测样本中抗体的阳性或者阴性，一般不用于定量检测。4、WB和ELISA的区别western blotting：可以看到特异性的条带，但是定量比较烦ELISA：可以直接读出浓度，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可信。WB：只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点elisa做不到ELISA：可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响WB：所检测的一般是抗原，而elisa抗原抗体都可以检测。WB：所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB可以确定所用抗体是与哪种蛋白起作用的；而elisa无能为力，一锅端了。WB：所适用的一抗一般是线性位点的，elisa线性或构象型抗体都可以使用。从另一个意义上讲，WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定，而elisa不行。WB：一次处理量就是一块胶版，10-20个样品最多了。elisa一块96孔板一次可以处理96个样本，可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。WB：操作常见的非特异性条带，膜本底差，显色不好等等缺点在elisa上表现得要好得多。

做实验最怕的是什么？早起抢仪器？熬夜写报告？放假看文献？都不是！最怕的是——辛辛苦苦做了很久的实验，到才发现买的试剂盒居然是假的那才叫一夜回到解放前我们阅读大量的文献精心设计实验课题事无巨细的实验流程这一切的努力就是为了有一个满意的实验结果可是，每当实验结果出现偏差我们大都只会反复检查样品、模板、引物序列等很少有人会质疑购买的试剂产品尤其是那些进口、知名品牌的产品然而，假冒产品无处不在在国内生物研讨蓬勃发展的如今，冒充无视科学研讨的谨慎性和严肃性，让广阔的科研工作者被迫造假，严重破坏了科研空气，扰乱了市场秩序，沪震生物整理了一些辨别这些冒充伪劣ELISA试剂盒的办法，供广阔的科研工作者和用户参考，让期望对广阔科研工作者有所协助。事实上无论在国内还是在国外，都会存在假冒伪劣产品，我们要擦亮眼睛学会鉴别，假不乱真，假货的出现和传播也同样有它的内在规律，以下是假试剂常见的现象，希望大家以后尽量避免买到假货。常见现象1.抗体的有效性用重组蛋白生产的抗体不一定会和天然蛋白有效结合，必须用生物体中的蛋白去验证重组蛋白生产的看题的有效性；2.稀释真品想掺水的假酒一样，不良商家将一份抗体稀释成五份销售，使抗体效价下降，与说明书标注的严重不符，这是试剂造假中惯用的小伎俩；3.进口分装正规品牌为了保证产品质量和品质的稳定性，不会搞出口分装，因为试剂盒中试剂都是一一对应的，很难给分装试剂的空间，如果是进口分装，十有八九是假货；4.滥竽充数，以次充好不法商贩以一些来历不明的试剂以次充好，瓶子是回收的，质量无法保证，5.无同源性指标出现相似的标准品数值两个不同甚至没有序列同源性的试剂盒，经历了交叉实验后，标准品数值相似甚至相同，那么必定是假货无疑了；6.检查种属用不同种属的试剂盒替代，由于同一种蛋白有一定同源性，实验结果的准确性可能会差一点7.替换指标，真假混卖用TGFβ以假乱真，TGFβ是在大多数哺乳类动物中广泛表达的物质，其种属间抗原的氨基酸序列同源性达到百分之百，但在实验中会随其他因子影响而导致表达水平发生相应变化，这些变化很难被察觉，有了这些指标，公司就能以假乱真。面对这一个假货横行的市场，该如何鉴别ELISA试剂盒的真假？采购前办法一向厂家索要或从其下载阐明书，查找ELISA的性能目标：准确度(加标回收率、稀释线性)、精密度(板内差、板间差)、灵敏度、样本值、特异性、校准。一般来说，除了校准不一定每份阐明书都有外，其他的目标一般都需求罗列(有些样本需求高倍稀释的，也许没有准确度这个目标)。假如无法供给这些性能目标，则阐明该试剂盒也许是假货，或许试剂盒开发进程不行科学谨慎，有也许无法检查出真实的样本值。办法二关于夸张ELISA包括的目标的规模，尤其是不常见的种属，可先到世界ELISA试剂盒供货商上查找，假如查找不到该种属的ELISA试剂盒，则有也许是假货，需求小心翼翼。办法三将“厂家名”、“ELISA”和“假货”等关键词在网上查找，采购后办法一查看阐明书、包装盒的质量，一般冒充伪劣产品为了降低成本，打印的质量会比较差。其次仔细阅读阐明书，如上所示查找ELISA的性能目标。办法二1.假如采购了两盒同一公司的ELISA试剂盒A和B，使用穿插试验即可辨别ELISA试剂盒是不是造假，办法如下： (1) 取出采购的试剂盒A的包被板两条。(2) 一条包被板加试剂盒A的规范品做规范曲线。(3) 另一条包被板加试剂盒B的规范品做规范曲线。(4) 后续操作依照试剂盒阐明书进行，加检查抗体、酶复合物和底物。(5) 试验结束后，检查两条规范曲线，假如两条规范曲线共同则阐明两个ELISA试剂盒检查的同一个目标而非A和B，即该试剂盒为伪劣编造ELISA试剂盒。(6) 假如两条规范曲线不共同则阐明两个ELISA试剂盒检查的不一样目标，试剂盒A只能检查A，不能检查B，即该试剂盒为正常的ELISA试剂盒。2. 使用搅扰试验即可辨别ELISA试剂盒是不是检查意图抗原，办法如下： (1) 将对于试剂盒特异性的重组蛋白抗原和试剂盒中的检查抗体装备成antibody: antigen= 1:2的混合孵育液(2) 37℃孵育15分钟后，替代原试剂盒中的检查抗体(3) 后续操作依照试剂盒阐明书进行，加检查抗体、酶复合物和底物(4) 试验结束后，检查其规范曲线，假如规范曲线良好则阐明参加的意图抗原和试剂盒抗体不匹配，试剂盒检查抗体对于的对错意图抗原，该试剂盒为伪劣编造ELISA试剂盒。(5) 假如规范曲线无线性，则阐明试剂盒检查抗体已被意图抗原中和或搅扰，影响了其实践试剂盒抗体的检查效果，则该试剂盒检查抗体对于的是意图抗原。用假冒伪劣的ELISA试剂盒坑害广大的科研工作者，他们往往唯利是图，无视科学研究的严谨性和严肃性，让广大的科研工作者被动造假，严重扰乱了科研工作，

提到ELISA，做科研的老师们都很自信不就是简单的抗原抗体反应嘛？但大家口中最简单的免疫反应往往在实际操作中一个不小心结果就会相差甚远，甚至功亏一篑假阳性或者假阴性会让人焦头烂额那么，这到底为什么呢？ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，再检测过程中除正常反应外，有时会出现一些错误结果，引起错误结果的原因主要有一下几个因素：一、标本因素二、试剂因素三、操作因素四、环境因素首先我们来看看标本因素标本因素：标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种。内源性物质外源性物质类风湿因子标本溶血补体标本污染嗜异性抗体贮存过久自身抗体凝集不全医源性诱导的抗体采血管中添加物交叉反应物有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物，可以不同程度影响检测结果，1.类风湿因子人血清中IgC、IgM型风湿因子（RF）可以与ELISA系统中的捕捉抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，导致假阳性，2.补体ELISA系统中固相一抗和二抗过程中，抗体分子发生变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q可以将二者链接起来，从而造成假阳性。3.嗜异性抗体人类血清中含有能与啮齿类动物（如鼠等）Ig（s）结合的天然嗜异性抗体，可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来，可能造成假阳性。4.嗜靶抗原的自身抗体抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体，有时能与靶抗原结合形成复合物，再ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定结果，5.医源性诱导的抗鼠Ig（s）抗体鼠源性CD3等单克隆抗体治疗，用放射性同位素标记鼠源性抗体的影像诊断及靶向治疗等新技术，均有可能是病人体内产生抗鼠抗体，另外，被鼠等啮齿类动物咬伤的病人体内也可以产生抗鼠Ig（s）抗体，这些病人ELISA测定是均可产生假阳性。6.交叉反应物质类地高辛、类AFP样物质等，是与靶向抗原有交叉反应的物质，再用多抗测定抗原是对测定结果影响不大，但在用单克隆抗体测定抗原时，假如交叉抗原决定簇正好是所用单克隆抗体相对应的靶决定簇时，也会出现假阳性结果。外源性物质：1.标本溶血红细胞溶解释放的血红蛋白具有过氧化物酶活性，在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中，会导致非特异性显色，故标本采集时应避免溶血2.标本受细菌污染菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，同溶血标本一样，可产生非特异性显色而干扰测定结果，3.标本保存不当标本放置时间过长，会使抗原或抗体免疫性减弱，可出现假阴性，4.标本凝集不全再没有促凝集可抗凝剂的情况下，正常血液采集后1.5~2h开始凝固，18~24h完全凝固，临床检验工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，此时的血清中仍残留部分纤维蛋白原，再ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；这类情况于次日复查时血凝已完全，血清中不再有纤维蛋白原存在，故复查结果变为阴性，为避免上述干扰作用，血液标本采集后使其充分凝固在分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。5.标本管中添加物的影响抗凝剂（如肝素，EDTA）、酶抑制剂（如NaN3可抑制ELISA系统中辣过氧化物酶活性）及分离胶等均对ELISA测定有一定干扰作用。试剂因素试剂应选择灵敏度高，稳定性强，批间差小，操作方便的试剂盒不同厂家的试剂不能混用，注意试剂的批号和出厂日期   4.避免买到假的试剂盒操作因素一、加样1.加样不可太快，避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样时如有气泡，抗原抗体不能有效地结合会导致弱阳性甚至假阴性。2.每次加标本应更换吸头，以免发生交叉污染。3.加酶结合物、加底物，应使加液量准确均-，加液过程迅速完成。滴加时，除了要注意滴加的角度垂直外，滴加的速度也很重要。滴加太快，很容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象。4.有些测定需用稀释的血清,应保证稀释液与血清混合均匀。二、洗板在ELISA中正确的洗涤是保证得到可重复结果的关健一步，应弓|起操作者重视。ELISA就是靠洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以消除残留在板孔中没能与固体抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。三、显色有研究报道按A、B液的顺序分别滴加和将A、B液混合后滴加，检测结果有显著差异,中值阳性和高值阳性分别平均下降了33.6%和30.0%[2]。OPD (邻苯二胺)底物显色一般在室温或37°C反应20-30分钟后即不再加深，再延长反应时间，可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色，显色反应应避光进行。TMB ( 四甲基联苯胺)受光照的影响不大，可在室温中置于操作台.上，边反应观察结果。TMB经HRP作用后，约40分钟显色达顶峰，随即逐渐减弱，至2小时后即可完全消退至无色。四、比色作为记录测定结果的仪器，酶标仪的性能稳定与否，决定结果的可靠度。1.定期进行保养，对滤光片要定期校正。2.设置要正确，使用双波长oon3.读数时先擦试微孔板底部并压平板条。4.酶标仪不要安置在阳光或强光照射下，5.使用前先预热仪器15-30分钟，测读结果更稳定环境因素一、通风、采光与防尘二、控制温度及湿度三、消除噪音与电磁干扰四、稳定水电，综上所述，ELISA检测结果是受多方面因素影响，尽量避免或减少人为干扰因素对结果的影响，

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。在检测时，受检标本（测定其中的抗原）与固相载体表面的抗体反应。洗涤后加入酶标记的抗体，通过反应结合在固相载体上。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。一、ELISA样本的处理ELISA的检测目的是为了实验提供准确的实验依据，为了保证实验数据的可靠性，在实验过程中必须坚持全面的质量控制和全过程质量控制，在收集标本前都必须有一个完整的计划注意事项1、每个样本量收集体积=100ulx检测种类，如果要做复孔，标本量收集体积=100ulx检测种类x22、样本收集后若在一周内进行检测可保存于2-8°C，若不及时检测，请进行分装，冻存于-20°或-80°C，避免反复冻融3、试剂盒的检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本。4、血清标本采集是应注意避免溶血，红细胞溶解是会释放出具有过氧化物酶活性的物质，溶血标本可能会增加非特异性显色5、为了保证尿液检测的准确性，必须正确收集尿液标本和保存，收集尿液的容器必须要清洁干燥，最好使用一次性的容器，避免因用药并清洁不到而造成的污染，尿液样本必须新鲜，留取后，应及时检测或保存6、标本宜在新鲜是检测如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中可能发生聚合，间接法ELISA中乐视本底加深，7、反复冻融会使蛋白效价降低，所以待测样本如需多次检测，宜少量分装冻存二、标本类型01、ELISA的常见标本液体类标本：血清、血浆、尿液、细胞上清、脑脊液等培养细胞组织标本02、ELISA标本的保存一般来说，再5天内测定的血清标本可放置于4°C，标本再冰箱中保存时间过长会导致血清IgG聚合，是间接法的试剂本底加深，超过一周测定的需-20°C保存，冻结血清溶解后，蛋白质局部浓缩，分不均，应充分混匀并避免产生气泡，浑浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。测抗体的血清的标本如需保存作多次检测，以少量分装冰存，保存血清只采集是就应注意无菌操作，也可加入适当的防腐剂，抗凝不完全的标本因纤维蛋白元的干扰而造成假阳性，建议劲量不使用抗凝血尤其是肝素抗凝剂。03、ELISA标本的处理1、血清：室温血液私人凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，如有沉淀形成，应再次离心3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成分时，用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）仔细收集上清，检测细胞内的成分时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右，通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成分。5.组织标本：切割标本后，称取重量，加入一定量的PBS，PH7.4，用液氮迅速冷冻保存备用，标本融化后任然保持2-8°C的温度，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，分装后一份待检测，其余冷冻备用，6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行试验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20°C保存，单应避免反复冻融。三、ELISA的检测方法ELISA的检测方法有直接发、间接法、竞争法基双抗夹心法，其中直接法和竞争法应用较少，应有最多的是双抗夹心法，其在敏感性基因【特异性上有明显的优势，直接法将抗原固定于ELISA班上，然后用酶标抗体直检测抗原。相较于其他类型的ELISA实验，直接ELISA实验步骤少，检测速度快，不需要用到二抗，避免了交叉反应，检测结果不容易出错，但是由于直接ELISA的抗原不是特异性固定的，样本中的靶蛋白及其他杂质蛋白都会与ELISA版结合，实验背景会比较高，而且直接ELISA每种靶蛋白都需要准备能够与其特异性结合的一抗，实验不太灵活。另外由于没有使用二抗，信号没有被放大，降低了测定的灵敏度。间接法将抗原固定于ELISA班上，随后分两步进行检测：首先加入检测抗体于抗原特异性结合，随后加入酶标二抗检测并利用底物显色。于直接ELISA相比，间接ELISA用到酶标二抗，具有更高的灵敏度，也需要更少的标记抗体，更经济，间接ELISA还提供了更大的灵活性，缺点：存在交叉反应的可能性（酶标二抗直接与抗原结合），可能会增加背景，同时与直接ELISA相比，间接ELISA实验多了二抗孵育的步骤，实验周期延长。夹心法被检测的抗原包被再两个抗体之间其中一个抗体将抗原固定于载体上，即捕捉抗体，另一个则是检测抗体，此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量，或不标记，再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量，这两种抗体必须小心选取，才可以避免交互反应货竞争相同额抗原结合部位。竞争法预先将抗原包被再固相载体上，并加入酶标记的特异性抗体，实验是，加入待检抗原（或抗体），如果待检物是抗原，则待检抗原于预先包被再固相载体上的抗原竞争结合酶标抗体，如果待检测物是抗体，则待检抗体就与系统中原有的酶标抗体竞争结合包被再固相载体上的抗原，通过洗涤洗掉被竞争结合的酶标抗体，最后加底物显色，需要注意的是显色结果与待检抗原（或抗体）的量成反比竞争ELISA相对以上的三种方法更复杂一些，但以上三种ELISA类型都适用于竞争ELISA的形式，其主要有点在于可检测不纯的样品，且数据再现性高，但存在整体敏感性和专一性较差的问题。四、双抗夹心法的操作步骤ELISA实验的原理1.包被：抗原或者抗体能以物理性吸附于固相载体表面，原因是蛋白质和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，吸附之后能保持抗原反应等免疫活性：2、标记：抗原或者抗体可通过共价键与酶连接成酶结合物而此种酶结合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特点：3、显色：酶结合物与相应包被在固相载体的抗原或抗体结合后，也被固定在固相载体上，加入酶的底物之后可出现显色反应，根据反应的颜色深浅可计算抗原或者抗体的相对含量。如何 选择ELISA试剂盒？1.特异性：ELISA试剂盒的特异性于试剂盒的关键组分，抗体对有关，若抗体对中之一为多抗，另一个必须为单抗，建议使用双单抗，2、灵敏度：灵敏度反映的是试剂盒检出被检物质的最低量的能力，用户可根据自己样本中待检指标的量选择合适的试剂盒，如果待检指标量很低，一般的试剂盒不能满足要求，可选择高敏的ELISA试剂盒。3、重复性：科学实验讲求重复性，一般ELISA试剂盒，期板内和板间变异系数应该控制在15%以内。4、简便性：试剂盒在保证高质量数据的情况下，实验时间越短，操作越便利，越容易受到用户欢迎，五、ELISA的常见问题及解决方法问题可能原因解决方法高背景或阴性对照只偏高阴性对照孔被阳性对照货样品污染洗涤是，勿将洗液溢出孔外抗体非特异性结合封闭液不合适，更换封闭液酶结合物过浓请检查酶结合物是否按说明书规定稀释孵育温度过高检查孵育箱的温度是否正确、稳定底物再使用前曝光应保存再暗处、避光读板前停留时间过长加终止液后3分钟内读数标准曲标准曲线良好，但样本无检测信号样本中无检测物或检测无含量极低设置内参，重新实验样本中其它物质影响/掩盖检测作适当稀释，降低其它物质的干扰，或作系列稀释，检测回收率样本中检测物浓度过高，HOOK效应导致假低值适当倍数稀释样本，检测物浓度尽量在试剂盒检测范围内重复性较差微孔中有气泡用针尖挑破气泡试剂未混匀确保充分混匀试剂样本中有杂质或沉淀物使用前；离心微孔包被面被吸头划破加液是小心操作使用过的封板胶纸每次须使用新的封板胶封住反应孔假阳性反应洗涤不充分使用前需检查洗板机是否正常工作洗板机管道堵塞需经常维护洗板机加结合物是，洒在微孔边缘小心向微孔加入结合物，加入微孔底部中央，避免与孔壁和边缘接触微孔中液体挥发用封板胶密封反应孔，置于湿盒内边缘效应孵育温度不均衡避免在环境温度变化大的地方蒸发确保孵育是封闭完好酶标板叠放避免酶标板叠放

摘要：八月份的尾巴你的假期没有了九月份你要开学了还在沉浸在暑假里生物科研君们该醒醒啦假期余额已为0接下来要面对的是数不清的实验和导师大大的课题论文想想人都不好了该来的总会来，该走的也留不住所以还是打起精神来全身心投入科研工作中 正值开学之际沪震生物开学之际·下单有礼助你的科学实验更高效更有特惠活动，专治开学综合症！活动内容：ELISA试剂盒：买3盒，送小米电动牙刷/100元京东卡（二选一）买5盒，送小熊颈椎按摩器/200元京东卡（二选一）买10盒，送500元京东卡Ausgenex胎牛血清：买1瓶，活动价：4500元买5瓶，活动价：4300元送1640基础培养基/DMEM高糖培养基/PBS缓冲液（三选一）买10瓶，活动价：4200元活动时间：2021年9月1日——9月30日活动说明：1.本活动不与其他优惠同时享用（包括会员折扣优惠）2.本次活动的最终解释权归沪震生物公司所有3.如有疑问，请于销售沟通

前段时间小编给大家分享了WB/ELISA/IHC三大实验的内容，今天小编就来给大家简要梳理一些WB流程中的一些细节，避免因某一环节出现差错而导致实验重做。做蛋白研究的小伙伴都知道，一个完整的Western Blot包括了很多个步骤，从蛋白提取到配胶、上样电泳，再到转膜、封闭，最后孵育一抗二抗后才能去进行检测。时间跨度非常长，而且这中间的每一步都包含了很多的小细节，稍有不慎就会导致结果出错，然后又得从头来过。所以，关于WB，几乎每一位经验丰富的实验老手都有着一本厚厚的血泪史。一：样品的获取与制备一般来说我们检测的样本主要为细胞或者组织，制备的过程中尽量保持低温，其次在制备时一定要根据目的蛋白的特性选择合适的裂解液，比如对膜蛋白的提取、胞浆蛋白的提取和组织蛋白的提取等。二：配胶、上样及蛋白电泳配胶前将玻璃清洗干净烘干（用纸巾擦干/有时间50°C烘干）。晾干后根据蛋白分子量进行不同浓度凝胶配制，上样是需要把蛋白进行煮沸变性，如果进行定量分析一定要将所有蛋白上样量调制相同，电泳时低压（80V）跑浓缩胶，高压（120v）跑分离胶，至溴酚蓝即将跑出胶面时终止电泳。三：转膜及封闭膜的选择主要从实验目的和实验要求来考虑。例如，要做分子量小于20kD的小蛋白，0.45μm的NC膜是不可取的，因为这样可能会使得蛋白因透过膜孔而造成膜结合的目的蛋白量不确定，从而影响到最终结果的可靠性。而如果所分离的蛋白需要进行测序，则非PVDF膜不可，因为只有PVDF膜才能经受住严酷的清洗条件。建议转移之后迅速在 Tris-Buffered Saline (TBS) 中洗涤膜，以便移除残留的转移缓冲液，随后在室温条件下含5% 脱脂牛奶的 Tris Buffered Saline 和 Tween® 20 去污剂 (TBST)中封闭1小时。这一封闭步骤有助于降低非特异性一抗结合并降低背景。应避免膜封闭时间过长，因为这会掩盖抗原表位，阻止抗体结合。封闭后在TBST 中洗涤5分钟。四：抗体的孵育和检测抗体孵育：目的蛋白印迹在膜上，经过封闭之后，印迹目的蛋白与一个或多个抗体孵育。第一个抗体（一抗）与目的蛋白结合，而第二个抗体（二抗）与第一个抗体结合，二抗本身结合有酶或染料，可用来指示蛋白的位置。不过有些一抗也具有直接标记的功能，但使用标记二抗有明显优势。首先不止一个二抗分子能与单个一抗分子结合，形成信号；其次，标记的二抗可用于大量不同特异性的一抗，因而无需标记多个一抗。直接western blot检测方法：在直接检测方法中，酶直接连接到一抗上。操作简单，检测步骤少。虽然直接检测是快速和直接的，但它往往比间接检测的灵敏度低，因为在这个过程中可以发生信号放大的步骤更少。此外，酶直接标记到一抗上可能会造成成本和资源上的限制。间接western blot检测方法：间接检测方法比直接检测方法更受欢迎，主要是灵敏度更高。通过间接检测，识别感兴趣的抗原的抗体，称为一抗，检测是通过添加标记的二抗实现的，二抗可以识别一抗上的特定表位。这种表位通常是种属特异性的；例如，在兔体内产生的几种不同的一抗都可以被同一种抗兔二抗体所识别。

对于任何一个科研菌都不陌生。BUT为甚么别人的实验,时间短跑胶快？除了实验精细化操作,当然也离不开选择最佳的试剂，和对关键实验步骤的优化设计。科研就像赛跑，你比别人跑的快，就比别人多发几篇SCI~火辣七月月，咱们从IHC说起……OURDREAM什么是IHC（免疫组化）是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及相对定量的研究，SUMMER实验流程1. 洗载玻片:将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中,目的是为了是载玻片上的硅胶等除去,同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整,便于组织吸 附,然后置于清水中清洗,除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4(大约冲一个小时左右),再将载玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上,置于37°C温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys带正电，而大多数的组织带负电荷，从而产生吸附作用。2.包埋组织:先在铁模具中加入一些液态石蜡，先稍微冷却，然后再将待包埋的组织置于石蜡之中，并排列整齐，再将塑料模具盒盖上，最后加入少许液体石蜡，进行冷冻，使石蜡变成固态。3. 切片：将包埋好的组织从模具上取下来，并置于石蜡切片机上，切片机通过调节上下左右来来使组织和切割方向一致，然后调节切片的厚度，一般为 5µm,如果比较难切，则可以适当调整厚度，用毛笔将切割的载玻片向外拉，并用小镊子将包含有完整组织的载玻片置于40°C温水中。4.捞组织：当组织载玻片置于40°C温水中之前，要先将水浴中的气泡赶走，以免气泡受热上浮而贴到组织上，组织受热展开，最好是组织不起皱纹，用载玻片 捞组 织时，一般取载玻片的下1/3或者下1/2一般每种组织捞5-6张，其中2-3张是备用的，每张载玻片上通常捞两份组织，做对照使用，这样形成的误差就比 较小了，而且捞载玻片的时候最好方向一致，以便观察，再将捞出来的载玻片置于架子上，放入37°C温箱中烘干。5.脱蜡：依次将载玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精，起脱蜡作用的主要是二甲苯, 依据 的是相似相溶的原理.一般在每个试剂中放10min,天气热可以少放几分钟,相反,天气较冷的话,就要适当延长脱蜡时间,一般为12-15min.6. 抗原修复：脱蜡后在清水中冲洗一段时间，加入3%H2O2浸泡10min，从而除去内源性的过氧化氢酶，然后倒掉H2O2，在清水中洗两次，再加入柠檬酸 缓冲液，放入微波炉中蒸煮3min（中火），一般刚到沸腾即可，冷却至室温，然后再蒸煮一次，冷却至室温，蒸煮的目的是为了使抗原的位点暴露出来。7. 血清封闭：冷却至室温后，将柠檬酸缓冲液倒掉，水洗2次，并将载玻片置于PBS中5min，洗2次，擦干组织周围的PBS液，马上加上血清，使一些非特异 性的位点封闭起来，然后放入37°C温箱中半小时。血清稀释10倍（900µlPBS：100µl血清封闭 液）。8. 加一抗：将温箱中的载玻片取出，用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围的血清，加一抗，如果做对照实验，就在对照的组织上加PBS。加完一抗后于4°C冰箱中保存过夜。9. 加二抗：将载玻片从冰箱中取出，放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上二抗,然后置于37°C温箱中半小时。10. 加SABC:将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上SABC, 然后置于37°C温箱中半小时。SABC稀释100倍（990µlPBS：10µlSABC）。11. 加显色剂：将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上显色剂。（显色剂的配置：在1ml水中加1滴显色剂A，摇匀，然后加1滴显色剂B，摇匀， 再加1滴显色剂C，摇匀） A：DAB B：H2O2 C：磷酸缓冲液12. 复染：将显色后的片子用清水冲洗一段时间后，浸泡于苏木精中染色，一般动物组织为半分钟，植物组织3-5min。13. 脱水：将复染后的片子置于水中冲洗后，依次将载玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯。每个试剂中放置2min，最后浸泡在二甲苯中，搬到通风柜中。14.  封片：用中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上，要先放平一侧，然后轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好片子后置于通风柜中晾干。（免疫组化图）SUMMER注意事项1、固定 ：Z好用4%的多聚甲醛固定液。对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；但对于不同的组织和抗原 ，可选用不同的固定液。有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。2、石蜡片与冰冻片的选择：石蜡片制作多设备要求较冰冻片低，组织结构更好，保存条件简单时间也久。但对部分蛋白有较强烈的破坏作用，对蛋白保护较冰冻片差。冰冻片对蛋白的保护较石蜡片好，制作起来也比较快。3、灭活内源性酶： HRP系统：3%双氧水灭活；AP系统：3%HAc灭活。4、暴露抗原 ： 对于石蜡切片的免疫组化实验时，必须采用高温加热抗原修复，这将有助于暴露抗原决定簇，从而增加免疫组化染色的强度(不同抗体的Z佳修复液请参阅抗体说明书)。对于不同的组织，不同的抗原，不同的抗体，所采用的方法应不一样，可进行热修复、胰酶消化、既不修复也不消化。胶原还可以用胃蛋白酶消化等。5、封闭：常用的封闭液有5%BSA和血清，BSA是通用型。血清应选择与二抗同源的血清。6、显色： 一定要在显微镜下观察，注意控制背景。7、组织脱水，透明 ：时间不能太长，否则在切片时容易碎片，切不完整。SUMMER常见问题一、缺乏染色可能的原因建议没有抗原用原位杂交的方法检测蛋白表达（有时即使能检测到mRNA。翻译也有可能受阻）由于错误的储存方法按照说明书储存。通常，将抗体按照足够配制单次实验工作溶液的体积分装。储存在手动除霜冰箱中（-20到-70℃），避免反复冻融无效的一抗或二抗单独检查报告系统以评估试剂的有效性。固定不充分尝试增加固定时间或改用不同的固定剂不兼容的二抗和一抗使用可以与一抗结合的二抗。例如，如果一抗是兔源的，则使用抗兔的二抗在与一抗孵育前抗原被破坏如果内源性过氧化物酶的封闭是在加入一抗前进行的，则改为加入一抗之后在封闭抗原修复无效增加修复时间或更换修复液二、高背景可能原先建议一抗或二抗的浓度过高对抗体进行滴定以确定获得特异性反应的最佳浓度抗体和组织中蛋白的疏水相互作用降低抗体稀释液的离子强度（降低盐浓度对单克隆抗体尤其有效）一抗和/或二级试剂与组织的非特异性结合一抗孵育前进行封闭（我们用1%的牛血清蛋白或者10%的正常驴血清，也可以使用脱脂奶粉）组织过于干燥在染色过程中避免组织干燥固定过度改变抗原修复方法或减小抗原修复强度显色底物过量或显色时间太长缩短底物孵育时间封闭不充分选择合适的封闭液，延长封闭时间

做实验最怕什么?早起抢仪器？熬夜写报告？......都不是。这些是家常便饭，最怕的是辛辛苦苦做了很久的实验，才发现做出来的效果不满意，这个时候我们就需要学习一套标准的实验流程了。IHC(免疫组化)、ELISA(酶联免疫吸附试验)、WB (免疫印迹)，是免疫学三大常用工具，分别用于定位，定性和定量。WB简介WB（免疫印迹试验）即Western Blot。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物（NC膜或PVDF膜）上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。实验步骤一蛋白质样品获得:细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13,000r离心15min。取上清液作为样品。二电泳:制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。三转移:(半干式转移)1、电泳结束后将胶条割至合适大小，用转膜缓冲液平衡，5min×3次。2、膜处理:预先裁好与胶条同样大小的滤纸和NC膜，浸入转膜缓冲液中10min。3、转膜:转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好，滤纸、凝胶、NC膜精确对齐，每一步去除气泡，上压500g重物，将碳板上多余的液体吸干。接通电源，恒流1mA/cm2，转移1.5hr。转移结束后，断开电源将膜取出，割取待测膜条做免疫印迹。将有蛋白标准的条带染色，放入膜染色液中50s后，在50%甲醇中多次脱色，至背景清晰，然后用双蒸水洗，风干夹于两层滤纸中保存，留与显色结果作对比。四免疫反应:1、用0.01M PBS洗膜，5min ×3次。2、加入包被液，平稳摇动，室温2hr。3、弃包被液，用0.01M PBS洗膜，5min×3次。4、加入一抗(按合适稀释比例用0.01M PBS稀释，液体必须覆盖膜的全部)，4℃ 放置12hr以上。阴性对照，以1%BSA取代一抗，其余步骤与实验组相同。5、弃一抗和1%BSA，用0.01M PBS分别洗膜，5min×4次。6、加入辣根过氧化物酶偶联的二抗(按合适稀释比例用0.01M PBS稀释)，平稳摇动，室温2hr。7、弃二抗，用0.01M PBS洗膜，5min×4次。8、加入显色液，避光显色至出现条带时放入双蒸水中终止反应。常见问题Q:没有信号？可能原因建议抗体浓度太高了优化/降低一抗和二抗的浓度上样蛋白量太少增加样品的量转移效率太低改进转移实验步骤。确保PVDF膜用之前用甲醇预孵育一抗已经被用很多次了使用重新稀释的一抗封闭不充分延长封闭时间，更换核实的封闭剂（脱脂奶粉、BSA、酪蛋白）抗体与其它蛋白质交叉反应更换不同的封闭液；勿在含生物素体系中使用脱脂奶粉封闭；降低二抗浓度；检测二抗与膜的交叉反应性。洗膜不充分增加洗涤次数膜干燥保证充分的反应液，避免出现干燥现象一抗或二抗的孵育时间太短延长孵育时间叠氮化钠可能抑制二抗溶解缓冲液中应避免使用叠氮化钠Q:实验结果无信号或信号弱可能原因建议检测样品不表达目的蛋白选择表达量高的细胞作为阳性对照，确定检测样品是否为阴性检测样品低表达目的蛋白提高上样量，裂解液中加入蛋白酶抑制剂膜漂洗过度减少漂洗的时间和次数抗体增加抗体浓度；更换有效抗体（抗体失效）抗原不足增加上样量抗原被封闭液遮蔽试用不同的封闭液；优化封闭液中蛋白质浓度；缩短封闭时间蛋白质样品在存储过程中降解重新制备样品一抗失效使用有效期内抗体，分装保存，避免反复冻融取用，工作液现配试用Q:无目的的条带可能原因建议样本目的蛋白表达量过低或无表达确认样本可行性，对表达过低的样本进行富集后在进行式样蛋白提取过程中降解蛋白提取时，保持低温状态，并加入蛋白酶抑制剂蛋白样本保存条件不合适，蛋白降解蛋白样本建议加入上样缓冲液煮沸变性后保存，对于稀有样本建议分装于-80°C保存看题赋予弄滴过低或时间过短优化抗体孵育量，一抗建议4°C过夜孵育一抗二抗检测体系不匹配选择合适的一抗二抗抗体失活争取保存抗体显影液使用时间过长使用新鲜试剂，并避光保存Q:其它异常情况可能原因建议反影或膜上可见黄色条带一抗二抗体浓度过高或样本上样量过大，导致美被瞬间消耗白色空点转膜三明治制备是有气泡，或者抗体孵育不均匀，应震荡孵育黑色斑点背景封闭液颗粒残留，在使用前应充分搅拌溶解微笑条带条带迁移过快，降低电压；胶凝固不均匀，正确制备凝胶；皱眉条带电泳时，电泳丝底物聚集大量气泡，导致电压不均衡条带拖尾样品内有不溶物，离心或者优化样本蛋白提取；上样量过载，降低上样量；使用凝胶浓度不合适，蛋白分辨率较低，调整交联剂比例；电泳液反复使用多次，重新配置新鲜电泳液；条带扭曲胶界面不平导致歪斜货凝胶制备不均匀；样本中盐离子浓度过高，干扰泳；电压过高，电泳迁移过快

做实验最怕什么?早起抢仪器？熬夜写报告？......都不是。这些是家常便饭，最怕的是辛辛苦苦做了很久的实验，才发现做出来的效果不满意，这个时候我们就需要学习一套标准的实验流程了。IHC(免疫组化)、ELISA(酶联免疫吸附试验)、WB (免疫印迹)，是免疫学三大常用工具，分别用于定位，定性和定量。ELISA(酶联免疫吸附试验)ELISA简介利用抗原抗体之间专一性键结之特性，对检体进行检测；由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性，因此设计其键结机制后，配合酵素呈色反应，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并可利用呈色之深浅进行定量分析。实验步骤ELISA(酶联免疫吸附试验)注意事项1、操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度(保持在18 C~25℃)、反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，要先查看水育箱温度，是否符合要求。2、正确使用加样器加样器应垂直加入标本或试剂，避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要清洗干净，避免污染，加样次序要与说明书一致，否则可导致结果错误，实验重复性差。3、手工洗板加洗液时冲击力不要太大，洗涤次数不要超过说明书推荐的洗涤次数，洗液在反应孔内滞留的时间不宜太长。不要使洗液在孔间窜流，造成孔问污染，导致假阴性或假阳性。4、要保证加液量一致 我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好，滴瓶不易控制加液量不准，造成显色不统一，判断错误。5、显色液量不可过多 加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加显色系统后要避光反应，显色液量不能过多，以免显色过强。6、试剂的影响因数:应选用有国家批准文号，质量靠得住的产品，不能图便宜，忽视质量保证。试剂应妥善保存于4℃冰箱内，在使用时先平衡至室温，不同批号的试剂组分不宜交叉使用。试剂开启后要在一周内用完，剩余的试剂下次用时应先检查是否变质，，显色剂如被污染变色将造成全部显色，导致错误结果。过期的试剂不宜再用，若别无选择，应做好双份质控品的监测，确保结果的可靠性。ELISA(酶联免疫吸附试验)常见问题操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环问题一:景或阴性对照值偏高可能原因建议阴性对照孔被阳性对照或样品污染洗涤时，  勿将洗液溢出孔外抗体非特异性结合 封闭液不适合，更换封闭液酶结合物过浓请检查酶结合物是否按说明书规定稀释孵育温度过高 检查孵育箱的温度是否正确、稳定底物在使用前曝光应保存在暗处，避光读板前停留时间过长加终止液后3分钟内读数问题二:标准曲线较差可能原因建议标准瓶溶液配置有误确认是否进行正确稀释标准品复溶不当 开盖前进行离心；检查复溶是否存在不溶物标准品已降解按推荐方式保存和处理标准品曲线的标度不合适 尝试使用不同标度绘制曲线，例如双对数、5参数拟合移液器加样误差正确使用经过校准的移液器问题三:标准曲标准曲线良好,但样本无检测信号可能原因建议样本中无检测物或检测物含量极低设置内参， 重新实验样本中其他物质影响/掩盖检测  作适当稀释，降低其他物质的干扰，或作系列稀释,检测回收率样本中检测物浓度过高，Hook效应导致假低值适当倍数稀释样本,检测物浓度尽量在试剂盒检测范围内问题四:显色缓慢可能原因建议样本未置于室温 实验开始前，将样本平衡至室温酶结合物活性减弱 检测稀释度酶活性收到抑制如叠氮钠 避免实验不当的防腐剂显色温度不适当按说明书操作

细胞因子受体中的共享链大多数细胞因子受体是由两个或两个以上的亚单位组成的异源二聚体或多聚体，通常包括一个特异性配体结合α链和一个参与信号的β链。α链构成低亲和力受体，β链一般单独不能与细胞因子结合，但参与高亲和力受体的形成和信号转导。应用配体竟争结合试验、功能相似性分析以及分子克隆技术发现在细胞因子受体中存在着不同细胞因子受体共享同一种链的现象。

 IL-8R家族三个成员的特性比较IL-8RAIL-IRBRBCCKR分子量（kDa）606039糖基化有有有G蛋白连接有有可能无信号转导中Ca2+有有受体特异性IL-8特异性CXC亚族中几种配体共同更宽，结合CXC和CC亚族中多种配体（微小间日疟受体）配体结合亲和力IL-8（lnM）IL-8(lnM)IL-8、NAP-2、RANTES、MCP-1（5nM）NAP-2(450nM)NAP-2(1～2nM)3.受体的信号转导 IL-8RA和IL-8RB中紧接第三个穿膜区（TMDⅢ）的第二个胞内环（i2）有一段高度保守的DRYLAIVHA序列，与受体信号的转导密切相关，其中DRY对于受体有效地偶联G蛋白是必要的，如用突变方法改变此序列，虽然不影响受体与配体的结合，但几乎完全丧失了配体刺激的生物学活性。IL-8R与配体结合后使与受体结合的异源三体G蛋白分解为α亚单位和βγ亚单位，α亚单位活化磷脂酶C（phospholipase C,PLC），导致胞浆内三磷酸肌醇（IP3）和二酰基甘油（DAG）增加，分别诱导胞浆内Ca库释放Ca2+和PKC的活化。此外，IL-8RA和IL-8RB C端丝氨酸和苏氨酸残基的磷酸化可能与信号的转导有关。4.趋化因子受体与病毒最近发现某些感染人或灵长类病毒的开放读框产物与某些趋化因子受体有较高的同源性，这可能与病毒的致病以及病毒所具有的某些生物学特性有关。（1）人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）:是一种可感染人上皮细胞、髓样和淋巴样细胞的β疱疹病毒（βHerpesvirus)。HCMV3个开放读框US27、US28和UL33所推断的氨基酸序列在分子结构上均可模拟STR，其中US28产物与人MIP-1α/RANTEsR约有30%同源性，与该受体N端的同源性高达56%。US28产物可与趋化因子β亚族中MIP-1α、MIP-1β、MCP-1和RANTES相结合，但不能结合α亚族中的趋化因子。（2）Saimiri疱疹病毒（Herpesvirus saimiri,HVS）:是一种感染灵长类动物嗜T细胞的γ疱疹病毒（γHerpesvirus)。HVS开放读框ECRF3产物与IL-8R有近30%的同源性，与IL-8Rb N端的同源性为44%。ECRF3产物与IL-8、GROα和NAP-2均可发生一定程度的结合。HCMV-US28和HVS-ECRF3探针不能与人基因组DNA杂交，提示疱疹病毒不仅从宿主体内获得了趋化因子受体基因拷贝，而且进行了修饰。类似的现象见于嗜人B淋巴细胞的γ疱疹病毒-EB病毒(EBV),EBV开放读框BCRF1是从宿主体内获得的IL-10基因,BCRF1产物又称为病毒IL-10(vIL-10),可模拟哺乳动物IL-10的抗炎症和抗增殖效应。

趋化因子受体结构模式图2.IL-8受体家族IL-8R家族是趋化因子受体中能与IL-8结合的不同受体的总称，包括IL-8RA、IL-8RB和RBCCKR。（1）IL-8RA：IL-8RA cDNA1991年基因克隆成功，是Holmes等从中性粒细胞cDNA表达文库中分离得到，人IL-8RA基因定位于染色体2q35，与IL-8RB基因密切连锁和高度同源，可能是从同一祖先基因经复制而来。从cDNA推算出IL-8RA由350氨基酸组成，有5个N连接的糖基化位点。裸肽分子量为40kDa，糖基化后55～69kDa，在氨基酸水平上与IL-8RB的同源性为77%。IL-8RA只与配体IL-8（碱性，PI8.0～8.5）结合，这与IL-8RA的结构有关，IL-8Ra N端酸性氨基酸是与IL-8结合的位置，N端Asp11和e3中Gly275和Arg280对于与配体结合至关重要，由于Cys30与Cys277之间形成二硫键，Asp11、Glu275和Arg 280在空间置上十 分接近，共同参与同配体的结合。IL-8RA基因表达的细胞种类较为广泛，如中性粒细胞、单核细胞、PGA活化的T细胞、单核细胞样细胞系、黑素瘤细胞、滑液成纤维细胞、HL60细胞和前髓样细胞系THP-1等。（2）IL-8RB：IL-8RB cDNA是首先从HL60细胞中克隆成功，推断的氨基酸残基数为335，有一个潜在的N连接糖基化位点。IL-8RB可与CXC亚族中IL-8、GROα、GROβ、GROγ和NAP-2结合。人IL-8RB主要表达于髓样细胞，如中性粒细胞、HL60、THP-1和AML193细胞。（3）RBCCKR：这种受体结合配体的特异性较宽，又称multi-specificreceptor,可结合CXC亚族中的IL-8、NAP-2、GROα和CC亚族中的MCP-1和RANTES。人RBCCKRcDNA1993年克隆成功，基因定位于1q21-q25，成熟受体分子由338个氨基酸组成，分子量为39kDa，与IL-8RB和MIP-1α/RANTESR分别有27%和23%同源性。胞膜外区为66个氨基酸，含有2个潜在的N连接糖基化点，酸性。C端胞浆区长24个氨基酸残基，RBC-CKR似乎不G蛋白调节，可能是一种G蛋白的非偶联受体。最近研究表明，RBCCKR是人红细胞Duffy抗原（gpD），也是微小间日疟原虫（Plasmodium vivax）受体。Duffy血型阴性个体尽管存在着该血型的原因，但不表达Duffy抗原/RBCCKR。RBCCKR作为一种清除受体（clearance receptor)清除血液中趋化因子。这种受体与配体结合的亲和力Kd为5nM，正常血清中IL-8水平在pM水平。在成人呼吸窘迫综合征（ARDS）、脓毒症时，血清IL-8水平可升高至8nM，过高水平的IL-8结合到RBCCKR而得以清除。IL-8等趋化因子结合到红细胞上后即失去了对靶细胞作用。红细胞的这种清除作用的意义还在于维持一个合适的趋化因子浓度，保证中性粒细胞等敏感地从血液中向趋化因子浓度高的炎症部位动。RBCCKR除表达在红细胞上外，还表达在肾脏、大脑，基因表在这还见于脾、肺和胸腺等。

Spherotech  Spherotech微球、Spherotech乳胶微球、Spherotech荧光微球、Spherotech顺磁性微球、Spherotech铁磁性微球和多种Spherotech有色微球SpherotechSpherotech公司是全球蕞知名的微球产品生产商之一。Beckton Dickinson(BD)公司即用Spherotech的Rainbow荧光微球来对其流式细胞仪进行灵敏度的校验。Spherotech公司生产的微球广泛的应用于生物医学研究和诊断，包括免疫荧光和免疫酶学检测等。其微球适用于荧光显微镜技术、激光共聚焦(Confocal)技术、流式细胞术、影像细胞术、磁性细胞分离技术、磁珠酶免测定法(EIA)等多种检测方法。Spherotech常规生产高质量的乳胶微球、荧光微球、顺磁性微球、铁磁性微球和多种有色微球，这些微球表面可根据应用的需要添加不同的功能基团(如羧基和氨基等)。此外，Spherotech公司还生产各种包被有抗体或配体，如亲合素、链霉亲合素和生物素等的微球，用于免疫学的研究和临床。Spherotech官网产品目录：Spherotech微球、Spherotech乳胶微球、Spherotech荧光微球、Spherotech顺磁性微球、Spherotech铁磁性微球和多种Spherotech有色微球Polymer Microparticles  Polystyrene  Cross-Linked  Color DyedFluorescent  Up to 5 Micron  5 Micron and Larger  FITC Surface Labeled  Multiple Fluorophore  Polymethylmethacrylate  Coated Fluorescent  Functionalized Fluorescent MicrospheresCoated Particles  Antibodies & Proteins  Amino  Carboxyl  Other Functional GroupsFlow Cytometry  Absolute Cell Counting  Alignment  Calibration  Calibration and QC Kits  Cell Sorter Fine Tuning  Compensation  Size Standard Particle Kits  IR Fluorescent Channels  Threshold Determination Multiplex Bead Assays    Blue Particle Array Kits (PAK)    UV Carboxyl Particle Array Kits (UVPAK)   Fluorescent Particle Array KitsImaging Products Fluorescent Particle SlidesNanoparticles Nanoparticles  Gold NanoparticlesMagnetic  Ferromagnetic  Paramagnetic  Superparamagnetic  Coated Magnetic  Coated Ferromagnetic  Fluorescent Magnetic  Magnetic SeparatorsLife Sciences Products  Advangene PlasticwareOther Microspheres  SilicaCustom Custom Product RequestsPrice List Current Price ListAbout SpherotechSpherotech微球、Spherotech乳胶微球、Spherotech荧光微球、Spherotech顺磁性微球、Spherotech铁磁性微球和多种Spherotech有色微球Spherotech was established in 1992 to manufacture and supply uniform microparticles for biomedical and diagnostic applications. Our headquarters are 25 miles north of Chicago in Lake Forest, IL. As a global supplier of microparticle solutions, our experienced scientists manufacture high quality latex, fluorescent, paramagnetic, ferromagnetic and colored dyed microparticles. Our microsphere portfolio offers you:Particle size dispersion specific to your requirements.Functionalized surface chemistryCoated microbeads with antibodies, proteins, or ligandsCross-linked particles for greater organic solvent stabilityFlow cytometry grade microbeads for alignment, calibration, compensation, counting and sortingMicroparticles manufactured by Spherotech are utilized for:Fluorescence immunoassayEnzyme immunoassay (EIA)Fluorescence microscopyConfocal fluorescence microscopyFlow cytometry/ image cytometryMagnetic cell separationMagnetic particles EIAMicrofluidicsOther research and industrial applications.Spherotech specializes in microparticle research and development. We constantly introduce new products and improve the existing portfolio. Our loyal customers value Spherotech’s agile manufacturing capabilities, custom OEM particle solutions, and value-add supply options. Our manufacturing facilities can accommodate multi-liter lot sizes of our entire microsphere offering. While we publish an overview of our products, it is by no means comprehensive. If the particle you require is not listed, we urge you to contact our team to check our complete inventory. World class quality and technical support are standard practice. As an ISO 9001:2008 registered company, we consistently meet or exceed customer expectations. Spherotech’s scientists look forward to meeting your application specific requirements in microparticle technology.Contact Us NowISO Certificate & Quality Policy Ethics,Conductand Policy Spherotech的微球产品的用途：Spherotech微球、Spherotech乳胶微球、Spherotech荧光微球、Spherotech顺磁性微球、Spherotech铁磁性微球和多种Spherotech有色微球Fluorescence immunoassay 荧光免疫分析法Enzyme immunoassay (EIA) 酶免疫分析法Fluorescence microscopy 荧光显微镜法Confocal fluorescence microscopy 共聚焦荧光显微镜法Flow cytometry/ image cytometry 流式细胞术/成像细胞术Magnetic cell separation 磁性细胞分离Magnetic particles EIA 磁性微球酶免疫分析法Microfluidics 微流控技术Other research and industrial applications. 其他科研及工业应用spherotech公司成立于1992年，以制造和销售生物医疗和诊断应用的均一化微球为主。作为全球性的微球产品供应商，我们成就卓越的科学家们生产制造了高质量的乳胶微球；荧光微球；顺磁及铁磁微球；染色微球等产品。我们的产品可以给您提供：Particle size dispersion specific to your requirements.Functionalized surface chemistryCoated microbeads with antibodies, proteins, or ligandsCross-linked particles for greater organic solvent stabilityFlow cytometry grade microbeads for alignment, calibration, compensation, counting and sorting Spherotech部分产品目录：Spherotech微球、Spherotech乳胶微球、Spherotech荧光微球、Spherotech顺磁性微球、Spherotech铁磁性微球和多种Spherotech有色微球u 聚苯乙烯微球u 交联聚苯乙烯微球单纯的交联聚苯乙烯微球羧基交联聚苯乙烯微球氨基交联聚苯乙烯微球多孔交联聚苯乙烯微球u 功能化的聚苯乙烯微球羧基聚苯乙烯微球氨基聚苯乙烯微球JeffamineTM 聚苯乙烯微球二甲氨基聚苯乙烯微球羟基聚苯乙烯微球磺化聚苯乙烯微球u 蓝色微球羧基蓝色微球u 二氧化硅微球u 荧光微球单纯的荧光聚苯乙烯微球高密度荧光聚苯乙烯微球低密度荧光聚苯乙烯微球PMMA荧光微球多（重）荧光团的荧光微球FITC聚苯乙烯微球u 功能化的荧光微球羧基荧光微球氨基荧光微球羧基高密度荧光微球羧基低密度荧光微球二甲氨基荧光微球羧基多（重）荧光团的荧光微球u 流式细胞仪校准微球彩虹校准微球超级彩虹校准微球简易校准荧光微球彩虹校直微球别藻蓝蛋白校准微球黄色校准微球空白校准微球u 流式细胞仪校直及设置用微球超级彩虹荧光微球贝克曼流式细胞仪用校准微球彩虹荧光微球荧光校直微球彩虹校直微球u 流式细胞仪校准及QC试剂盒彩虹校准试剂盒彩虹QC试剂盒u 流式细胞仪补偿微球EasyComp荧光微球COMPtrol微球u 绝对计数微球AccuCount空白微球AccuCount荧光微球AccuCount彩虹荧光微球AccuCount超级彩虹荧光微球AccuCount荧光微球试剂盒u 流式细胞仪用其他微球液滴延迟校准微球规格标准试剂盒流式细胞仪IR荧光微球u 流式细胞仪多重检测显影微球试剂盒蓝色微球阵列试剂盒荧光微球阵列试剂盒u 荧光微球切片u 顺磁微球单纯的磁珠磁性交联微球u 功能化的顺磁微球羧基磁珠Jeffamine磁珠氨基磁珠二乙氨基磁珠二甲氨基磁珠u 表面光滑的顺磁微球单纯的光滑表面顺磁微球羧基光滑表面顺磁微球氨基光滑表面顺磁微球羟乙基光滑表面顺磁微球u 铁磁微球羧基铁磁微球氨基铁磁微球荧光羧基铁磁微球u 荧光顺磁微球单纯的荧光顺磁微球荧光羧基磁珠荧光氨基磁珠u 磁性分离器u 包被的聚苯乙烯微球链霉亲和素包被的聚苯乙烯微球亲和素包被的聚苯乙烯微球中性亲和素包被的聚苯乙烯微球生物素包被的聚苯乙烯微球羊抗小鼠IgG包被的聚苯乙烯微球羊抗大鼠IgG包被的聚苯乙烯微球羊抗人IgG包被的聚苯乙烯微球驴大鼠IgG包被的聚苯乙烯微球羊抗兔IgG包被的聚苯乙烯微球驴抗绵羊IgG包被的聚苯乙烯微球小鼠IgG包被的聚苯乙烯微球蛋白A包被的聚苯乙烯微球蛋白G包被的聚苯乙烯微球抗DNP包被的聚苯乙烯微球抗His包被的聚苯乙烯微球BSA包被的聚苯乙烯微球抗地高辛包被的聚苯乙烯微球谷胱甘肽包被的聚苯乙烯微球u 包被的荧光聚苯乙烯微球生物素包被的荧光聚苯乙烯微球亲和素包被的荧光聚苯乙烯微球链霉亲和素包被的荧光聚苯乙烯微球蛋白A包被的荧光聚苯乙烯微球蛋白G包被的荧光聚苯乙烯微球羊抗小鼠IgG包被的荧光聚苯乙烯微球羊抗人IgG包被的荧光聚苯乙烯微球大鼠抗小鼠IgG包被的荧光聚苯乙烯微球u 包被的磁珠生物素包被的磁珠亲和素包被的磁珠链霉亲和素包被的磁珠中性亲和素包被的磁珠兔抗HA包被的磁珠Con A包被的磁珠蛋白A包被的磁珠蛋白G包被的磁珠绵羊抗大鼠IgG包被的磁珠驴抗羊IgG包被的磁珠羊抗兔IgG包被的磁珠羊抗小鼠IgG包被的磁珠羊抗人IgG包被的磁珠蛋白酶包被的磁珠u 包被的磁性荧光微球生物素包被的磁性荧光微球链霉亲和素包被的磁性荧光微球u 包被的铁磁性微球链霉亲和素包被的铁磁性微球羊抗小鼠IgG包被的磁性微球

Milenia Biotec  国别：德国Milenia Biotec免疫诊断试剂盒 Milenia Biotec免疫诊断试剂盒About usThe company Milenia BiotecMilenia Biotec offers immunodiagnostic kits, that are distributed worldwide from our headquarters in Giessen.Our test systems help to carefully and rapidly diagnose various diseases. The results are the basis for medical doctors to do a targeted therapeutic approach. Therefore unneccessary therapies or hospital admissions can be saved and patients can be more comfortable.Our tests are very simple to run and they can be done at every location. For the calculation of results only minimal equipment is required. For instance, the "PolyCheck" products are read on a standard flat bed scanner. The lateral flow technology, on which our "QuickLine" Assays are based, even allows testing without any instrumentation!AllergyPolycheck® Inhalation Screen#MKIPC Z10 Tests#MKIPC 120 TestsPolycheck® Food Screen (Food)#MKFPC Z10 Tests#MKFPC 120 TestsPolycheck® Pediatric Screen (Pediatrics)#MKPPC Z10 Tests#MKPPC 120 TestsPolycheck® Mediterranean Screen (Southern Europe)#MKMPC Z10 Tests#MKMPC 120 TestsMilenia® QuickLine Total IgE#MQTE 120 TestsImmunologyMilenia® QuickLine HIT#MQHIT Z5 Tests#MQHIT 120 TestsMilenia® QuickLine HIT Positive Control#MQCOHIT 11 x 1 Fl.Milenia® QuickLine IL-6#MQL6 120 TestsMilenia® QuickLine IL-6 Control#MQCO6 12 x 3 Fl.Acanthocheilonema viteae-Antik?rper IgG#AF 940096 TestsAspergillus fumigatus-Antik?rper IgG#AF 610096 TestsEchinococcus multilocularis (Fuchsbandwurm) - Antik?rper IgG#AF 930096 TestsEchinococcus granulosus (Hundebandwurm) - Antik?rper IgG#AF 935096 TestsLeishmania infantum - Antik?rper IgG#AF 950096 TestsEntamoeba histolytica Antik?rper IgG#AF 955096 TestsMicrosporidia#AF 81002 x 50 TestsSchistosoma mansoni IgG#AF 960096 TestsStrongyloides ratti IgG#AF 945096 TestsToxocara canis-Antik?rper IgG#AF 920096 TestsMicroorganismsMilenia® GenLine Universal modul#MGUP 148 TestsMilenia® GenLine Lactobacillus/Pediococcus Screen#MGScLP 148 TestsMilenia® GenLine Megasphaera/Pectinatus Screen#MGScMP 148 TestsMilenia® GenLine Lactobacillus brevis#MGLBR Z24 TestsMilenia® GenLine Hop Resistance Screen Kit#MGHOR 148 TestsTest DevelopmentMilenia® HybriDetect#MGHD 1100 TestsMilenia® HybriDetect 2T#MGHD2 1100 TestsEquipmentMilenia® POCScan Reader#MSCAN 11 deviceMilenia® QuickLine HIT Catalog #: MQHIT 1HUMAN Size: 20 TestsMilenia® QuickLine HIT Catalog #: MQHIT ZHUMAN Size: 5 TestsMilenia® QuickLine Free IgE Catalog #: MQFE 1HUMAN Size: 20 TestsMilenia® QuickLine IL-6 Catalog #: MQL6 1HUMAN Size: 20 TestsMilenia® QuickLine IL-6 Whole Blood Catalog #: MQL6B 1HUMAN Size: 20 TestsMilenia® QuickLine IL-6 Control Catalog #: MQCO6 1HUMAN Size: 2 x 3 Fl.Milenia® QuickLine IL-6 WB Control Catalog #: MQCO6B 1HUMAN Size: 2 x 2 Fl.Milenia® QuickLine IL-8 Catalog #: MQL8 1HUMAN Size: 20 TestsMilenia® QuickLine CRP Catalog #: MQLRP 1HUMAN Size: 30 TestsMilenia® QuickLine Total IgE Catalog #: MQTE 1HUMAN Size: 20 TestsMilenia® QuickLine TNF-α amniotic Catalog #: MQLTA 1HUMAN Size: 20 TestsMilenia® QuickLine TNF-α ex vivo Catalog #: MQEVS 1HUMAN Size: 20 TestsMilenia® QuickLine TNF-α amniotic Control Catalog #: MQCOTA 1HUMAN Size: 2 x 3 Fl.Milenia® QuickLine TNF-α ex vivo Control Catalog #: MQCOEV 1HUMAN Size: 2 x 3 Fl.Milenia® Cytostick Interferon Catalog #: MCIFN 1HUMAN Size: 100 TestsMilenia® Cytostick IP-10 Catalog #: MCP10 1HUMAN Size: 100 TestsPolycheck® Inhalation Screen Catalog #: MKIPC 1HUMAN Size: 20 TestsPolycheck® Inhalation Screen Catalog #: MKIPC ZHUMAN Size: 10 TestsPolycheck® Food Screen （Nahrungsmittel） Catalog #: MKFPC 1HUMAN Size: 20 TestsPolycheck® Food Screen （Nahrungsmittel） Catalog #: MKFPC ZHUMAN Size: 10 TestsPolycheck® Pediatric Screen （P?diatrie） Catalog #: MKPPC 1HUMAN Size: 20 TestsPolycheck® Pediatric Screen （P?diatrie） Catalog #: MKPPC ZHUMAN Size: 10 TestsPolycheck® Mediterranean Screen （Südeuropa） Catalog #: MKMPC 1HUMAN Size: 20 TestsPolycheck® Mediterranean Screen （Südeuropa） Catalog #: MKMPC ZHUMAN Size: 10 TestsAcanthocheilonema viteae-Antik?rper IgG Catalog #: AF 9400HUMAN Size: 96 TestEchinococcus granulosus-Antik?rper IgG Catalog #: AF 9350HUMAN Size: 96 TestsEchinococcusmultilocularis-Antik?rper IgG Catalog #: AF 9300HUMAN Size: 96 TestsEntamoeba histolytica Antik?rper IgG Catalog #: AF 9550HUMAN Size: 96 TestsLeishmania infantum - Antik?rper IgG Catalog #: AF 9500HUMAN Size: 96 TestMicrosporidia Catalog #: AF 8100HUMAN Size: 2 x 50 TestSchistosoma mansoni IgG Catalog #: AF 9600Size: 96 TestsStrongyloides ratti IgG Catalog #: AF 9450HUMAN Size: 96 TestsToxocara canis-Antik?rper IgG Catalog #: AF 9200HUMAN Size: 96 TestsMilenia® POCScan Reader Item number: MSCAN 1Delivery: 1 devicePOCScan Printer Item number: MPFID 1Delivery: 1 deviceMilenia® HybriDetect  Catalog: MGHD 1Size: 100 TestsMilenia® HybriDetect HS Catalog: MGHT 1Size: 100 TestsMilenia® HybriDetect 2T Catalog: MGHD2 1Size: 100 Tests

Nanoimmunotech Nanoimmunotech公司主要提供大量各种高品质的微粒（微米和纳米颗粒），可以很容易的生物共轭。 生物共轭化试剂盒，生物共轭试剂盒，生物共轭服务 Nanoimmunotech公司，Nanoimmunotech代理，Nanoimmunotech一级代理，Nanoimmunotech现货 生物共轭化试剂盒，生物共轭试剂盒，生物共轭服务。详情介绍：NANOPARTICLES- GOLD NANOPARTICLES- GOLD NANOCLUSTERS- GOLD NANOSTARS- SILVER NANOPARTICLES- GOLD-COATED MAGNETIC NANOPARTICLES- OCTAHEDRAL MAGNETIC NANOPARTICLESBIOCONJUGATION KITS- LINKORIENTED KIT GOLD- OLIGOLINK KIT GOLD- LINKORIENTED KIT MAGNETIC- LINKAMINE KIT MAGNETIC- OLIGOLINK KIT ANTIBODYPROTEIN PURITY & CONCENTRATE KIT- PROTEIN PURITY & CONCENTRATE KITNANOPARTICLESCAT#PRODUCT NAMESIZEPRICE/ € 51011315SCitrate stabilized 25 nm1 ml145,00€ 51011315W Citrate stabilized 25 nm 5ml5 ml295,00€ 51011315YCitrate stabilized 25 nm 10 ml10 ml820,00€ 51011515SCitrate stabilized 40 nm1 ml197,70€ 51011515W Citrate stabilized 40 nm 5ml5 ml392,46€ 51011515YCitrate stabilized 40 nm 10ml10 ml616,31€ 51011415SCarboxylated 25 nm1 ml301,99€ 51011415W Carboxylated 25 nm 5ml5 ml913,87€ 51011415YCarboxylated 25 nm 10ml10 ml1.524,38€ 51011615SCarboxylated 40 nm1 ml228,80€ 51011615W Carboxylated 40 nm 5ml5 ml547,91€ 51011615YCarboxylated 40 nm 10ml10 ml927,23€ 51000317VCitrate stabilized 3nm -1 OD25 ml60,00€ 510003160Citrate stabilized 3nm - 1 OD100 ml125,00€ 51000316CCitrate stabilized 3nm - 1 OD250 ml240,00€ 51000316FCitrate stabilized 3nm - 1 OD500 ml400,00€ 51000417VCitrate stabilized 12nm - 1 OD25 ml60,00€ 510004160Citrate stabilized 12nm - 1 OD100 ml125,00€ 51000416CCitrate stabilized 12nm - 1 OD250 ml240,00€ 51000416FCitrate stabilized 12nm - 1 OD500 ml400,00€ 51002415SCarboxylated 0.8 nm 1ml1 ml (8 nmol)240,00€ 51002415W Carboxylated 0.8 nm 5ml1 ml (40 nmol)310,00€ 51002417VCarboxylated 0.8 nm 25ml25 ml (200 nmol)660,00€ 51002515SCarboxylated 1.5 nm 1ml1 ml (1,6 nmol)265,00€ 51002515W Carboxylated 1.5 nm 5ml5 ml (8 nmol)385,00€ 51002517VCarboxylated 1.5 nm 25ml25 ml (40 nmol)970,00€ 51002615SCarboxylated 2 nm 1ml1 ml (0,8 nmol)285,00€ 51002615W Carboxylated 2 nm 5ml5 ml (4 nmol)440,00€ 51002617VCarboxylated 2 nm 25ml25 ml (20 nmol)1.200,00€ 51008715SThiopronine 3 nm 1ml1 ml290,00€ 51008715W Thiopronine 3 nm 5ml5 ml465,00€ 51008717VThiopronine 3 nm 25ml25 ml1.320,00€ 51009815SAmine 1.5 nm 1ml1 ml295,00€ 51009815W Amine 1.5 nm 5ml5 ml495,00€ 51009817VAmine 1.5 nm 25ml25 ml1.375,00€CustomPVP stabilized Gold nanostarsCustomSilica coated Gold nanostars 51010615YCOOH-PEG 5000Da 20nm10 ml114,60€ 510106161COOH-PEG 5000Da 20nm 20ml20 ml201,21€ 51010815YCOOH-PEG 5000Da 25nm10 ml114,60€ 510108161COOH-PEG 5000Da 25nm 20ml20 ml201,21€ 51011015YCOOH-PEG 5000Da 30nm10 ml114,60€ 510110161COOH-PEG 5000Da 30nm 20ml20 ml201,21€ 51011215YCOOH-PEG 5000Da 35nm10 ml114,60€ 510112161COOH-PEG 5000Da 35nm 20ml20 ml201,21€ 51010515YCOOH-PEG 3000Da 20nm10 ml110,51€ 510105161COOH-PEG 3000Da 20nm 20ml20 ml193,01€ 51010715YCOOH-PEG 3000Da 25nm10 ml110,51€ 510107161COOH-PEG 3000Da 25nm 20ml20 ml193,01€ 51010915YCOOH-PEG 3000Da 30nm10 ml110,51€ 510109161COOH-PEG 3000Da 30nm 20ml20 ml193,01€ 51011115YCOOH-PEG 3000Da 35nm10 ml110,51€ 510111161COOH-PEG 3000Da 35nm 20ml20 ml193,01€ 51008315SCitrate stabilized 50nm1 ml80,00€ 51008315W Citrate stabilized 50nm 5ml5 ml210,00€ 51008317VCitrate stabilized 50nm 25ml25 ml740,00€ 51008415SCOOH-PEG 3000Da 50nm1 ml145,00€ 51008415W COOH-PEG 3000Da 50nm 5ml5 ml295,00€ 51008417VCOOH-PEG 3000Da 50nm 25ml25 ml820,00€ 51008515SCOOH-PEG 5000Da 50nm1 ml145,00€ 51008515W COOH-PEG 5000Da 50nm 5ml5 ml295,00€ 51008517VCOOH-PEG 5000Da 50nm 25ml25 ml820,00€ 51000517VCitrate stabilized 12nm - 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1 OD500 ml400,00€ 51001117VCitrate stabilized 30nm - 3 OD25 ml90,00€ 5100011160 Citrate stabilized 30nm - 3 OD100 ml280,00€ 51001116CCitrate stabilized 30nm - 3 OD250 ml614,00€ 51001217VCitrate stabilized 35nm - 1 OD25 ml60,00€ 510012160Citrate stabilized 35nm - 1 OD100 ml125,00€ 51001216CCitrate stabilized 35nm - 1 OD250 ml240,00€ 51001216FCitrate stabilized 35nm - 1 OD500 ml400,00€ 51001317VCitrate stabilized 35nm - 3 OD25 ml90,00€ 510013160Citrate stabilized 35nm - 3 OD100 ml280,00€ 51001316CCitrate stabilized 35nm - 3 OD250 ml614,00€ 51001417VCitrate stabilized 40nm - 1 OD25 ml60,00€ 510014160Citrate stabilized 40nm - 1 OD100 ml125,00€ 51001416CCitrate stabilized 40nm - 1 OD250 ml240,00€ 51001416FCitrate stabilized 40nm - 1 OD500 ml400,00€ 51001517VCitrate stabilized 40nm - 3 OD25 ml90,00€ 510015160Citrate stabilized 40nm - 3 OD100 ml280,00€ 51001516CCitrate stabilized 40nm - 3 OD250 ml614,00€ 51003117VCitrate stabilized 50nm - 1 OD25 ml60,00€ 510031160Citrate stabilized 50nm - 1 OD100 ml125,00€ 51003116CCitrate stabilized 50nm - 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1 OD250 ml240,00€ 51003716FCitrate stabilized 80nm - 1 OD500 ml400,00€ 51003817VCitrate stabilized 80nm - 3 OD25 ml90,00€ 510038160Citrate stabilized 80nm - 3 OD100 ml280,00€ 51003816CCitrate stabilized 80nm - 3 OD250 ml614,00€ 51003917VCitrate stabilized 90nm - 1 OD25 ml60,00€ 510039160Citrate stabilized 90nm - 1 OD100 ml125,00€ 51003916CCitrate stabilized 90nm - 1 OD250 ml240,00€ 51003916FCitrate stabilized 90nm - 1 OD500 ml400,00€ 51004017VCitrate stabilized 90nm - 3 OD25 ml90,00€  510040160Citrate stabilized 90nm - 3 OD100 ml280,00€ 51004016CCitrate stabilized 90nm - 3 OD250 ml614,00€ 51004117VCitrate stabilized 100nm - 1 OD25 ml60,00€ 510041160Citrate stabilized 100nm - 1 OD100 ml125,00€ 51004116CCitrate stabilized 100nm - 1 OD250 ml240,00€ 51004116FCitrate stabilized 100nm - 1 OD500 ml400,00€ 51004217VCitrate stabilized 100nm - 3 OD25 ml90,00€ 510042160Citrate stabilized 100nm - 3 OD100 ml280,00€ 51004216CCitrate stabilized 100nm - 3 OD250 ml614,00€ 51002717VLipoic acid 3nm - 1 OD25 ml78,00€ 510027160Lipoic acid 3nm - 1 OD100 ml143,00€ 51002716CLipoic acid 3nm - 1 OD250 ml272,00€ 51002716FLipoic acid 3nm - 1 OD500 ml492,00€ 51002817VLipoic acid 3nm - 3 OD25 ml121,00€ 510028160Lipoic acid 3nm - 3 OD100 ml314,00€ 51002816CLipoic acid 3nm - 3 OD250 ml1.345,00€CustomSilica coated Gold nanoparticles 510017155COOH-PEG 3000Da 12nm1 ml350,00€ 51001715W COOH-PEG 3000Da 12nm5 ml1.290,00€ 51001915SCOOH-PEG 5000Da 12 nm1 ml350,00€ 51001915W COOH-PEG 5000Da 12 nm5 ml1.290,00€ 51002115SCOOH-PEG 3000Da 30 nm1 ml350,00€ 51002115W COOH-PEG 3000Da 30 nm5 ml1.290,00€ 51002315SCOOH-PEG 5000Da 30 nm1 ml350,00€ 1002315WCOOH-PEG 5000Da 30 nm5 ml1.290,00€BIOCONJUGATION KITSCAT#PRODUCT NAMESIZEPRICE/ € 510086181LinkOriented Kit GOLD 30nm3 Small tests375,42€ 510086182LinkOriented Kit GOLD 30nm10 Small tests1.096,37€ 510086183LinkOriented Kit GOLD 30nm1 Big test1.052,63€ 510088181LinkOriented Kit GOLD 40nm3 Small tests  330,24€ 03000215SLinkOriented Kit MAGNETIC 200nm1 mL297,00€ 030001186OligoLink ANTIBODY Kit 100 μg Ab100 μg Ab220,28€ 030001187OligoLink ANTIBODY Kit 3x100 μg Ab3x100 μg Ab437,00€ 030001188OligoLink ANTIBODY Kit 5x100 μg Ab copy5x100 μg Ab639,00€ 03000315SLinkAmine Kit MAGNETIC 200 nm1 mL247,00€ 03000315U LinkAmine Kit MAGNETIC 200nm2 mL403,00€ 03000315W LinkAmine Kit MAGNETIC 200 nm5 mL783,00€ 03000315YLinkAmine Kit MAGNETIC 200 nm10 mL1.327,00€ 510088182LinkOriented Kit GOLD 40nm10 small tests919,09€ 03000215U LinkOriented Kit MAGNETIC 200 nm2 mL473,00€ 510088183LinkOriented Kit GOLD 40nm1 Big test889,85€ 03000215W LinkOriented Kit MAGNETIC 200 nm5 mL933,00€ 03000215YLinkOriented Kit MAGNETIC 200 nm10 mL1.557,00€ 03000418BOligoLink GOLD Kit 30 nm50 μl of 100 μM oligo99,46€ 03000418C OligoLink GOLD Kit 30 nm 3x50 μl3x50 μl of 100 μM oligo183,36€ 03000418D OligoLink GOLD Kit 30 nm 500 μl500 μl of 100 μM oligo200,00€PROTEIN PURITY & CONCENTRATE KITCAT#PRODUCT NAMESIZEPRICE/ € 20002173Protein Purify&Concentrate-3K kit5 units139,77€ 20003173Protein Purify&Concentrate-10K kit5 units139,77€ 20004173Protein Purify&Concentrate-30K kit5 units139,77€ 20005173Protein Purify&Concentrate-50K kit5 units139,77€ 20006173Protein Purify&Concentrate-100K kit5 units139,77€

NF-κB对动脉粥样硬化斑块易损性作用的研究动脉粥样硬化不稳定斑块中核因子κB(NF-κB)的表达情况,探讨NF-κB与斑块易损性之间的关系。方法健康兔24只,采用完全随机法分为对照组(Control组,8只,正常喂养)、稳定斑块组(AS组,8只,高脂喂养)、易损斑块组(VAP组,8只,高脂喂养+药物触发)。分别于喂养0周及16周时,各组动物抽取血液标本测定血脂、超敏C反应蛋白(hs-CRP);各组动物建模成功后,予以处死取主动脉标本,评价斑块稳定性,并采用免疫组化、Western-blot、RT-PCR技术检测斑块中NF-κB的表达,比较各组间的差异。结果组间区别喂养16周后,与Control组相比,AS组和VAP组兔的血脂、hs-CRP水平明显升高。当易损斑块经药物触发形成后,VAP组兔的校正斑块面积为(65.32±11.49)%,易损指数为(2.87±0.83),明显高于AS组的(40.58±6.88)%和(0.86±0.23),差异均有显著统计学意义(P

丁二磺酸腺苷蛋氨酸联合熊去氧胆酸对妊娠期肝内胆汁淤积症患者肝功能及妊娠结局的影响丁二磺酸腺苷蛋氨酸联合熊去氧胆酸对妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者肝功能及妊娠结局的影响。方法:选取2016年1月至2017年10月我院接诊的96例ICP患者,按照随机数字表法分为观察组和对照组,每组各48例,两组患者均给予常规基础治疗,对照组在此基础上给予熊去氧胆酸治疗,观察组在对照组基础上给予丁二磺酸腺苷蛋氨酸治疗,比较两组患者瘙痒、黄疸改善时间及治疗前后胆酸和肝功能指标检测结果,观察并对比两组母婴预后情况。结果:观察组瘙痒改善时间及黄疸改善时间均低于对照组(P0.05);两组患者治疗后TBA、CG、ALT、AST、TBiL、DBiL水平均低于治疗前,且观察组低于对照组(P0.05)。结论:丁二磺酸腺苷蛋氨酸联合熊去氧胆酸能够有效改善ICP症状和肝功能,降低不良母婴预后发生风险,可作为优选治疗方案。

瑞舒伐他汀对老年慢性心力衰竭患者氧化应激反应及血管内皮细胞功能的影响探讨瑞舒伐他汀对老年慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)患者氧化应激反应及血管内皮细胞功能的影响。方法选择2015年10月至2016年10月本院收治的老年CHF患者92例为研究对象,将其随机分为观察组和对照组,每组各46例。对照组患者给予常规治疗,观察组患者在常规治疗基础上给予瑞舒伐他汀治疗,连续治疗4周。分别于治疗前后检测并比较两组患者血清氧化-抗氧化系统指标及血管内皮细胞功能指标水平。结果治疗后,观察组患者肱动脉血流介导的舒张功能(flow mediated dilation,FMD)及血清一氧化氮(nitric oxide,NO)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平均显著高于治疗前和对照组(P0.05)。结论瑞舒伐他汀可以显著改善老年CHF患者氧化-抗氧化系统失衡及血管内皮细胞功能。

阿托伐他汀不同剂量对急性心肌梗死后心肌纤维化、心室重构及心功能的影响探讨不同剂量阿托伐他汀对急性心肌梗死(AMI)后心肌纤维化、心室重构及心功能的影响。方法将2015年3月—2017年3月因AMI在阳春市中医院就诊的98例患者纳入研究并随机分组,所有患者均行尿激酶溶栓。对照组49例采用20 mg阿托伐汀,观察组49例采用40 mg,治疗7 d后比较疗效差异。结果治疗后,两组半乳凝素-3(Gal-3)及左室射血分数(LVEF)均升高,基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B型脑钠肽(BNP)降低,差异有统计学意义;治疗后观察组LVEF高于对照组,Gal-3、MMP-9、BNP则更低,差异有统计学意义;观察组并发症总发生率为26.53%,低于对照组的53.06%,差异有统计学意义。结论高剂量阿托伐他汀可更好地预防AMI后心肌纤维化及心室重构,有助于心功能改善.

高泌乳素血症与多囊卵巢综合征患者胰岛β细胞功能及胰岛素抵抗的关系探讨高泌乳素血症与多囊卵巢综合征（PCOS）患者胰岛β细胞功能及胰岛素抵抗的关系。方法选取2017年1月至2017年12月我院收治的PCOS患者30例作为A组,另选取我院同期高泌乳素血症合并PCOS患者30例作为B组。比较两组患者的血清性激素水平、胰岛素释放试验结果、HOMA-IR、HOMA-β。结果两组患者的血清LH、E2和FSH水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。A组的血清T水平显著低于B组（P