关注
已关注
已认证
粉丝量 0
400-860-5168转3328
仪器信息网认证电话，请放心拨打
PCR反应出现假阳性的原因及对策
2024/09/14 10:08
阅读：1
分享：
方案摘要：
产品配置单：
伤寒、副伤寒及变形杆菌诊断菌液
型号： 10ml*5 10ml*3 10ml*8
产地：
品牌： 远慕
¥1
参考报价
GN增菌液（10ml）
型号： 10ml*20
产地：
品牌： 远慕
面议
参考报价
方案详情：
菌落PCR出现假阳性的原因：
可能使用了错误的PCR鉴定引物、样品间交叉污染、PCR试剂的污染、PCR扩增产物的污染、气溶胶污染以及实验室中克隆质粒的污染。‌
解决对策
‌1.使用了错误的PCR鉴定引物‌：
在进行菌液PCR时，如果使用了基因特异引物，可能会从游离的目的片段DNA上扩增出条带，而不是从重组质粒上，导致假阳性结果。推荐使用一对载体通用引物进行菌液PCR鉴定，以减少假阳性的发生‌。
2. ‌样品间交叉污染‌：
样品污染可能由于收集样本的容器被污染、样本放置时密封不严溢于容器外、容器外粘有样本而造成相互间交叉污染。此外，样本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染也可能导致标本间污染‌。
‌3.PCR试剂的污染‌：
在PCR试剂配制过程中，加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染，也是造成假阳性的原因之一‌。
‌4.PCR扩增产物的污染‌：
PCR反应中最主要最常见的污染问题是PCR扩增产物污染。极微量的PCR产物污染就可形成假阳性‌。
‌5.气溶胶污染‌：
在空气与液体面摩擦时可形成气溶胶，剧烈地摇动反应管、开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题‌。
‌6.实验室中克隆质粒的污染‌：
由于克隆质粒在单位容积内含量相当高，且在纯化过程中需用较多的用具及试剂，活细胞内的质粒具有很强的生命力，其污染可能性也很大，这也是造成假阳性的一个重要原因‌。
为了避免假阳性的出现，应采取适当的措施减少上述各种污染的可能性，如使用正确的PCR鉴定引物、严格操作规范、避免交叉污染等‌。
下载本篇解决方案：
薄层层析拖尾现象产生之原因及解决方法
薄层层析又叫薄层色谱，是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属固—液吸附色谱，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的质。此外，薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”。
生物产业
2024/09/12
DNA/RNA降解原因+预防措施
核酸降解是DNA/RNA分子中的碱基和戊糖间的氮糖苷键，或磷酸二酯键在物理因素、化学因素和生物因素等作用下发生水解，使DNA/RNA链发生断裂。
生物产业
2024/09/04
