2024/09/02 14:25
阅读:2
分享:方案摘要:
产品配置单:
方案详情:
复苏细胞是否贴壁跟你冻存时的操作有直接关系。而且细胞的传代数越多,即细胞越老,越禁不起低温的折腾。
复苏后,细胞有个休眠期,大约7-14天不等。只要不死,你就慢慢养着。突破了某个时间点,你会发现细胞又神奇的康复了。但要等到细胞状态良好,传2代以上再做实验。尤其是流式、RNA干扰之类的。
细胞不好贴壁,建议尝试以下6点:
1.复苏后洗涤一下,毕竟DMSO影响细胞的生长。
2.最好用塑料瓶培养,如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾胶原包被一下培养瓶,或者用盐酸对培养瓶进行蚀刻,效果应该还可以,或者涂fibronectin/collagen/BSA,也可以帮助细胞贴附。
3.还有就是观察冻存的细胞是否是完全死了,如果是的话是不可能贴壁的,因此在复苏后建议用台盼兰染色看一下死细胞和活细胞的数目及比例。
4.换液时间延长,尽量不要用力摇动。
5.尽量缩短复苏时间
6.操作的环境温度最好不要变动太多。
下载本篇解决方案:
bradford法测蛋白浓度误差原因分析
Bradford蛋白质测定法是根据蛋白质与染料结合的原理设计的。考马斯亮蓝染料(G-250)在酸性溶液中与蛋白质的碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基结合,使得染料的最大光吸收峰位置由原来的465nm变为595nm,溶液颜色也由原来的棕红色变为蓝色,反应迅速且稳定,形成的化合物颜色深浅在一定范围内与蛋白质浓度成正比关系,因此可通过测定结合染色后溶液在595nm处的光吸收度值来计算溶液中蛋白质的含量。
生物产业
2024/08/26
细胞不贴壁原因+促进细胞贴壁的方法
消化不够细胞本身就是成团的;若胰酶处理太久,容易造成细胞膜蛋白损伤,使细胞贴壁不紧,显微镜下观察立体感不强,严重的时候甚至会造成细胞死亡。
生物产业
2024/08/21
抗体亲和力从高变低的原因+提高方法
很多亲和力检测技术都需要提前对作用的分子进行标记处理,但标记处理常常会导致分子不是处于真正的原位环境,且可能带来其他无法预测的额外因素,为分子间相互作用的研究增加了难度。因此,无须标记、实时表征结合过程亲和力的测定方法为分子间相互作用研究提供了便捷。
生物产业
2024/08/19