瓷珠菌种保存法常见问题解答

1、菌种保存管能保存霉菌及酵母菌吗？

答：可以。对于霉菌等真菌需培养7 天进行保存，而酵母菌需培养三天将孢子洗脱下来进行保存，保存管中的小瓷珠可以作为介质来吸附孢子和菌丝，相当于砂土保存法中砂土作为载体起到的作用。

2、所有的菌都能保存吗？如果不是的话，什么样的菌可以保存？什么样的菌不可以保存？

答：可以。菌种保存的原理是预防或减缓DNA 复制时自发突变导致菌种退化，因此要创造代谢不活泼的状态，而菌种保存时使菌种进入休眠态（孢子、芽孢)，并创造干燥、低温、缺氧、缺营养的环境，创造的环境越接近此状态，所保存的菌种的时间就越长，所以从原理上讲，所有菌种都可用这种方法保存， 但需要注意的是，苛刻菌（如流感嗜血杆菌、脑膜炎萘瑟氏菌）等特殊细菌保存时，需-80℃或更低温度保存，才可以做到更长期的保存。

3、能用菌种保存管永久保存菌株吗？

答：温度越低，保藏效果越好。从目前的试验数据及实际保存效果来看，-20℃可保存1-5 年，-80℃或液氮中可保存5-10 年，不同菌种及不同的保存温度保存时间会有所不同（例如：大肠、沙门等常规细菌-20℃我们目前可以保存到6年）。但需要注意的是所保存的菌种需每年抽检进行生化特征的鉴定，确定菌株无变异。

4、菌种保藏时为什么要进行分离纯化？

答：分离纯化后才能获得单一菌株，单一菌株进行菌种保藏才有意义，防止菌种交叉污染和变异，这也是菌种保存的基本原则。

5、菌种保存管对于平板来说，对挑选菌落个数有要求吗？还是将整个平板的菌落全部刮入管中？

答：对于要保存的细菌一般是要进行2-3 次的纯化，要保证一个平板上的菌是由单一菌落传代而来的，所以在细菌保存的过程中，为了保证制备的菌悬液可以达到3-4MCF，是可以将整个平板的的细菌全部刮到管中的，如果平板长的比较满一般半个平板就够用，具体用量也根据菌种的不同有所差异，如霉菌、酵母菌在保存时，不适合用浊度法。

6、对于液体培养基培养的纯菌，是否也可以用咱们的菌种保存管？如果可以的话，怎么操作？

答：是可以用的，如果液体培养基能保证是纯菌的话，可以直接离心，弃掉上清，然后把保存管中液体吸进去充分混匀，然后再转移到菌种保存管中，整个过程要注意无菌操作。不过，一般菌种保存管最好选择平板菌落进行保存，因为液体培养基中有杂菌是不易观察出来的。

7、为什么在菌种保存时，要上下颠倒？为什么不能旋摇？

答：上下颠倒，可使菌悬液充分混匀，菌株充分、均匀地吸附到小瓷珠上，旋摇不利于菌悬液充分混匀,反而会使菌株全部沉淀于管底。

8、为什么在使用时要将管内的液体尽可能多的吸出？

答：吸出液体可避免反复冻融形成的冰晶对菌株的损伤，加快复苏的过程，因此，要尽可能的将与菌种混匀后的保存液吸净。而常用的甘油法，在复苏的过程中需用水浴锅快速溶解，在此过程中，对菌株伤害较大。

9、在使用后，菌种保存管的保存环境？需要-80℃冰箱吗？

答：本公司菌种保存管采用的是低温冷冻保存法，因此，使用后，需放置低温环境，如-20℃、-80℃或液氮中保存，而且温度越低，保存效果越好。用户需根据菌种的保存要求选择具体保存温度。

10、为什么说，如果有条件的话，菌种保存管最好置于-80 冰箱或液氮中？

答：因为，贮存在-70℃以下低温中能减少冰晶形成，可极大降低冰晶形成对细菌的伤害，同时可为被保存的菌种创造更低的代谢环境，从而延长细菌保存的时间。

11、为什么在取用菌株时，操作过程要求快速？

答：菌种保存复苏的原则，要求慢冻快融，之所以要求快速，是因为在菌种复苏的过程中, 长时间的溶解过程会对所保存的菌种造成损伤，而我们经过改良的保存方法最大程度的避免复苏所造成的影响，但我们还是建议遵循菌种的保存复苏原则，保证所复苏菌种的复苏率。

12、将菌株反复冻存，到底对菌株有什么影响？

答：低温会使菌株细胞内的水分形成冰晶，从而引起细胞结构尤其是细胞膜的损伤。细胞体积大者一般要比较小者对低温更为敏感，而无细胞壁者则比有细胞壁者敏感。如果放到低温（不是一般冰箱）进行冷冻时，会产生冰晶，冰晶呈针状，极易导致细菌的严重损伤。用电镜观察，可见细菌的核膜上有大量针尖样小孔，当从低温下移出并开始升温时，冰晶又会变大，故反复冻存，会对菌株造成极大损伤。

13、为什么有时候菌种的保存效果不佳？

答：1、可能是由于保存后未将保存液吸尽，反复冻融形成冰晶损伤菌株细胞，影响了菌株活性。

2、确定所保存的菌种是否为对数生长期的菌种，我们建议普通菌种保存为18小时内的新鲜菌种，而霉菌需要待孢子出现后保存其孢子。

14、该产品能否用于菌种的运送，如果可以在什么条件下运送？

答：就目前试验数据而言，我们建议可主要用于普通细菌的短期运送，对于厌氧菌在运送时最好让其处于厌氧环境下，2-8℃运送不超过5 天。另外需要说明的是如弧菌属和绿脓杆菌需要常温运送，其对2-8℃温度极其敏感。