2024/01/02 15:04
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方案摘要:
产品配置单:
人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA试剂盒kit说明书
型号: 48T/96T
产地:
品牌: 远慕
¥1
参考报价
方案详情:
人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)含量。
人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)水平。用纯化的人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1),再与HRP标记的黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)浓度。
试剂盒组成:
Reagent Quantity
酶标包被板 12well×8strips
标准品 1600pg/ml 1×0.5ml
标准品稀释液 1×1.5ml
酶标试剂 1×6ml
样品稀释液 1×6ml
显色剂A液 1×6ml
显色剂B液 1×6ml
终止液 1×6ml
30倍浓缩洗涤液 1×20ml×30flod
说明书 1
封板膜 2
密封袋 1
样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分) 。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分) 。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分) 。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.
细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)
。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万/ml
左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)
。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的
PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4)
,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分) 。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤:
1.
标准品:其浓度为1600pg/ml(贮液)。先将其稀释为1600pg/ml(标准曲线最高浓度)后,再准备5个稀释标准品的EP 管,每个EP
管中加入150μL
的标准品稀释液,如图所示依次倍比稀释成1600pg/ml,800pg/ml,400pg/ml,200pg/ml,100pg/ml,50pg/ml标准品稀释液(0pg/ml)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液
Tube 0 1 2 3 4 5
pg/ml 1600pg/ml 800pg/ml 400pg/ml 200pg/ml 100pg/ml 50pg/ml
2.
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μ
l,然后再加待测样品 10μ l(样品最终稀释度为 5 倍) 。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液:将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μ l,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μ l,再加入显色剂 B50μ l,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50μ l,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD
值大于标准品孔第一孔的 OD 值) ,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5) 。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD
值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD
值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 以上。
2.批内与批见应分别小于 9%和 11%
3.保存条件及有效期:
a.试剂盒保存:2-8℃。
b.有效期:6 个月
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