人可溶性白细胞分化抗原28(sCD28)ELISA试剂盒操作步骤

产品名称：人可溶性白细胞分化抗原28(sCD28)ELISA试剂盒
英文名称：Human soluble cluster of differentiation 28 (sCD28) ELISA Kit
试剂盒保存：保质期六个月，保存环境2-8℃(频繁使用时)；-20℃(较长时间不用时)。
性状：试剂盒(含试剂+酶联板+覆膜等)
规格：48T/96T,可以提供定量和定性
使用范围：仅供科研检测,不得用于临床.

实验原理：
本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被人可溶性白细胞分化抗原28多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人可溶性白细胞分化抗原28浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人可溶性白细胞分化抗原28含量。

操作注意事项：
(1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
(2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
(3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
(4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
(5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
(6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

名称    96孔配置    48孔配置    备注
微孔酶标板    8孔×12条    8孔×6条    无
标准品    0.3mL*6管    0.3mL*6管    无
样本稀释液    6mL    3mL    无
检测抗体-HRP    10mL    5mL    无
20×洗涤缓冲液    25mL    15mL    按说明书进行稀释
底物A    6mL    3mL    无
底物B    6mL    3mL    无
终止液    6mL    3mL    无
封板膜    2张    2张    无
说明书    1份    1份    无
自封袋    1个    1个    无

人可溶性白细胞分化抗原28(sCD28)ELISA试剂盒 样本处理及要求：
1.  血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过一夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.  血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。*后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4.  细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

人可溶性白细胞分化抗原28(sCD28)ELISA试剂盒 标本要求：
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。