关注
已关注
已认证
粉丝量 0
400-860-5168转3328
仪器信息网认证电话，请放心拨打
质粒提不出和得率较低的原因分析
2023/11/16 11:06
阅读：36
分享：
方案摘要：
产品配置单：
载体构建，质粒载体
型号： 5μg
产地：
品牌： 远慕
¥760
参考报价
方案详情：
质粒提不出和得率较低的原因
1 ) 大肠杆菌老化：
请涂布平板培养后，重新挑选新菌落进行液体培养。
2 ) 质粒拷贝数低：
由于使用低拷贝数载体引起的质粒DNA 提取量低，可更换具有相同功能的高拷贝数载体 。
3 ) 菌体中无质粒：
有些质粒本身不能在某些菌种中稳定存在，经多次转接后有可能造成质粒丢失。例如，柯斯质粒在大肠杆菌中长期保存不稳定，因此，不要频繁转接，每次接种时应接种单菌落，另外，检查筛选用抗生素使用浓度是否正确。
4 ) 碱裂解不充分：
使用过多菌体培养液，会导致菌体裂解不充分。
5 ) 吸附柱过载：
不同产品中吸附柱吸附能力不同，如果需要提取的质粒量很大，请分多次提取。
6 ) 质粒未全部溶解(尤其质粒较大时)：
洗脱溶解质粒时，可适当加温或延长溶解时间。
7 ) 乙醇残留：
漂洗液洗涤后应离心尽量去除残留液体，树脂型试剂盒漂洗后应晾干树脂，再加入洗脱缓冲液。
8 ) 洗脱液加入位置不正确：
洗脱液应加在硅胶膜中心部位以确保洗脱液会完全覆盖硅胶膜的表面达到最大洗脱效率。
9 ) 洗脱液不合适：
DNA只在低盐溶液中才能被洗脱，如，洗脱缓冲液EB(10mM
Tris•Cl，pH8.5)或水。洗脱效率取决于pH值。最大洗脱效率在pH7.0～8.5间。当用水洗脱时确保其pH值在此范围内，如果pH过低可能导致洗脱量低。洗脱时将灭菌蒸馏水或洗脱缓冲液加热至60℃后使用有利于提高洗脱效率。
下载本篇解决方案：
大肠杆菌表达体系出现无或低蛋白表达结果因素
大肠杆菌表达体系为什么会出现无或低蛋白表达的结果？诱导前后蛋白存在毒性或者表达过程中密码子有偏向性，都可能造成蛋白不表达或低表达的结果。
生物产业
2024/07/11
微生物菌种衰退原因分析+复壮方法
不适宜的培养和保藏条件是加速菌种衰退的另一个重要原因。不良的培养条件如营养成分、温度、湿度、pH值、通气量等和保藏条件如营养、含水量、温度、氧气等，不仅会诱发衰退型细胞的出现，还会促进衰退细胞迅速繁殖，在数量上大大超过正常细胞，造成菌种衰退。
生物产业
2024/07/09
复苏的细胞不贴壁问题解决
复苏细胞是否贴壁跟你冻存时的操作有直接关系。而且细胞的传代数越多，即细胞越老，越禁不起低温的折腾。复苏后，细胞有个休眠期，大约7-14天不等。只要不死，你就慢慢养着。突破了某个时间点，你会发现细胞又神奇的康复了。但要等到细胞状态良好，传2代以上再做实验。尤其是流式、RNA干扰之类的。
生物产业
2024/07/04
琼脂糖凝胶电泳常见问题解决
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
生物产业
2024/07/01
企业名称： 上海远慕生物科技有限公司
企业地址： 上海浦东新区 联系人： 安小姐 邮编： 201600 联系电话： 400-860-5168转3328
仪器信息网APP
展位手机站